Cel mai utilizat test chimic pentru determinarea pigmenților biliari în ser este reacția Van den Berg. În această reacție, pigmenții bilirubinei sub influența acidului sulfanilic pierd azot, produsele cromogene sunt determinate calorimetric. Folosind reacția Van den Berg, este posibil să se facă distincția indirectă de bilirubina directă datorită solubilității diferite a acestor pigmenți. Dacă reacția are loc într-un mediu apos, atunci reacționează numai bilirubina directă solubilă în apă (așa-numita reacție directă Van den Berg). Dacă apare în metanol, atunci legăturile de hidrogen intramoleculare ale bilirubinei indirecte se rup; astfel, reacția bilirubinei atât directe, cât și indirecte permite determinarea nivelului său total. Cantitatea de bilirubină indirectă poate fi calculată scăzând valoarea care determină cantitatea de bilirubină obținută în reacția directă Van den Berg din valoarea care determină cantitatea totală de bilirubină.
Cu reacția directă a lui Van den Berg, cele mai exacte rezultate se obțin cu un timp de reacție de 1 min. Dacă reacția durează mai mult, atunci o cantitate mică de bilirubină indirectă poate începe să reacționeze în mediul acvatic. Ca rezultat, dacă reacția durează 30 de minute, atunci la un pacient cu hiperbilirubinemie cauzată de bilirubina indirectă, se poate determina un nivel eronat de scăzut de bilirubină indirectă. Aceasta indică faptul că valorile obținute pentru reacțiile directe și indirecte ale lui Van den Berg sunt aproximative (acestea nu sunt valori absolute).
Cea mai precisă metodă de măsurare a cantității de bilirubină din fluidele biologice este determinarea formării esterilor metilici ai bilirubinei (metanoliză alcalină) și a concentrației acestora utilizând cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC). Studiile efectuate utilizând această metodă arată că plasma normală conține în principal bilirubină indirectă și că doar mai puțin de 4% din totalul bilirubinei se află în fracția directă. Aceasta confirmă opinia de lungă durată că valoarea mică a bilirubinei directe (1-3 mg / l) determinată de metoda Van den Berg este eronată, cu ajutorul acestei reacții se determină o cantitate supraestimată de bilirubină directă, care este de fapt conținută în plasma normală. Metoda HPLC face, de asemenea, posibil să se determine că un pacient cu afecțiuni hepatice și bilirubinemie datorată bilirubinei directe are o cantitate semnificativă atât de mono, cât și de diconjugați în ser. În rezumat, principalele diferențe în proprietățile și reacțiile pigmenților de bilirubină considerați sunt prezentate în tabel. 38-1.
Tabelul 38.1. Diferențe cheie între bilirubina directă și indirectă
1 Aceste proprietăți se referă la bilirubina IXa naturală. Alte soiuri geometrice și fotoizomeri se comportă la fel ca bilnrubinul direct (vezi textul).
2 Determinat în plasmă în condiții de colestază (vezi text).
Determinarea calitativă a bilirubinei în urină poate fi efectuată utilizând comprimatele Iktotest sau prin metoda de scufundare. Testul spumei este, de asemenea, simplu și permite o evaluare calitativă. Când agitați energic urina normală în eprubetă, spuma va deveni complet albă și, dacă există bilirubină în urină, aceasta devine galbenă. Această diferență poate fi subtilă și devine evidentă doar atunci când se face o comparație directă între probele normale de urină și probele de urină care conțin bilirubină.
Formarea bilirubinei se bazează pe degradarea hemoglobinei hem și a altor proteine \u200b\u200bși enzime care conțin hem. Hemul se descompune în biliverdină, care se reduce la bilirubină.Bilirubina liberă este toxică, insolubilă în apă și circulă în sânge în combinație cu albumina. Această bilirubină dă o reacție indirectă Van den Berg (după precipitarea albuminei cu alcool), de aceea se numește indirectă.
Bilirubina indirectă, fiind legată de albumină, nu trece prin membranele intacte ale glomerulilor renali și nu este filtrată în urină.
Excreția bilirubinei se efectuează cu bilă prin intestine. Bilirubina legată de albumină este transportată de sânge la ficat. Bilirubina pătrunde cu ușurință în membranele hepatocitelor, albumina rămâne în fluxul sanguin. În hepatocite, bilirubina este conjugată cu acid glucuronic, transformându-se în bilirubină mono- și diglucuronidă. Glucuronidele bilirubate formate sunt netoxice și ușor solubile. Acestea sunt trimise cu bilă la intestin pentru eliminare din corp.
Din intestin, glucuronidele bilirubante pătrund parțial în fluxul sanguin și, fiind în sânge, reprezintă o fracțiune din bilirubina directă, ceea ce dă o reacție directă Van den Berg.
Bilirubina directă, spre deosebire de bilirubina indirectă, pătrunde cu ușurință în filtrele renale și poate fi excretată în urină.
În condiții fiziologice, serul conține aproximativ 25% bilirubină directă (legată de acidul glucuronic) și 75% bilirubină indirectă (albumină-bilirubină).
Astfel, bilirubina totală din sânge este cantitatea totală de bilirubină indirectă și directă.
La persoanele sănătoase, serul conține bilirubină 1,7-20,5 μmol / L; direct - 0,4-5,1 μmol / l.
Pentru a determina bilirubina, se utilizează o metodă colorimetrică, care se bazează pe reacția Van den Berg. Reacția se desfășoară în două etape: în prima, sub influența acidului clorhidric, se rupe lanțul tetrapirol și se formează doi dipiroli, în a doua, ambii derivați dipirrolici sunt diazotizați cu acid diazofenilsulfonic cu transformarea lor în azobilirubină. Conținutul fracționat al bilirubinei este determinat folosind o metodă Van den Berg modificată propusă de Endrassik.
Metoda este acceptată ca unificată.
Principiul metodei
Bilirubina reacționează cu cuplarea azo cu acidul sulfanilic diazotizat pentru a forma o soluție de colorant azoic. Intensitatea culorii este proporțională cu conținutul de bilirubină și este detectată fotometric.
Metoda originală a lui Van den Berg stabilește doar natura reacției (directă, indirectă, întârziată), adică există o predominanță a uneia sau altei bilirubine în serul sanguin. Metoda Endrassik, Cleghorn și Grof face posibilă determinarea fracțională a conținutului de bilirubină. Este simplu, convenabil în practică, nu este asociat cu utilizarea de reactivi puțini și este cel mai acceptabil pentru laboratoarele practice.
Se recomandă determinarea imediat după prelevare pentru a evita oxidarea bilirubinei în lumină. Hemoliza serică reduce cantitatea de bilirubină proporțional cu prezența hemoglobinei. Prin urmare, serul sanguin nu trebuie hemolizat ..
Formula chimică a bilirubinei IXα
Bilirubina (lat. bilis bilă + ruber roșu) - unul dintre pigmenții biliari galben-roșii.
Compoziția chimică a moleculei de bilirubină este C 33 H 36 O 6 N 4. Greutate moleculară - 584,68. În forma sa pură, bilirubina este o substanță cristalină formată din cristale de formă romboidal-prismatică de culoare galben-portocaliu sau roșu-maroniu, greu solubile în apă.
În centrul moleculei de bilirubină, la fel ca toți derivații săi, se află patru inele pirol moștenite de la hemoglobină. Două grupări hidroxil sunt responsabile pentru proprietățile chimice acide ale bilirubinei și capacitatea sa de a forma săruri. Dispunerea grupărilor hidroxil are variante, a căror principală este atașarea lor la 2 și 3 inele pirol (bilirubina IXα).
Formele chimice ale bilirubinei și numele acestora
În mod tradițional, există două forme chimice principale ale bilirubinei:
bilirubină liberă + acid glucuronic \u003d bilirubină legată
În acest caz, bilirubina poate fi asociată cu o moleculă de acid glucuronic (bilirubină monoglucuronidă) sau cu două (bilirubină biglucuronidă).
Bilirubina este, de asemenea, împărțită în indirect și drept... De mult timp, s-a dezvoltat practica conform căreia bilirubina indirectă este identificată cu liberă și directă - cu legată. Dar acest lucru nu este în întregime adevărat.
Cu privire la diferența dintre bilirubina directă și legată
Faptul este că termenii bilirubinei „indirecte” și „directe” nu sunt chimice, ci tehnologice și reflectă rezultatul bilirubinei, utilizat pe scară largă pentru identificarea în laborator. Din moment ce se credea că bilirubina indirectă este gratuită, iar cea directă este exclusiv legată, acești termeni au fost folosiți în mod interschimbabil.
Această schemă simplă și-a pierdut corectitudinea după ce a fost descoperită o altă formă chimică de bilirubină: biliproteină, sau bilirubina delta.
Delta-bilirubina participă la reacția Van den Berg în mod similar cu bilirubina legată și este considerată ca rezultat direct împreună cu aceasta. Prin urmare formula "bilirubină directă \u003d bilirubină legată" este adevărat numai pentru persoanele sănătoase la care delta-bilirubina este practic absentă. În unele condiții dureroase, bilirubina directă poate fi de 60-90% delta-bilirubină:
bilirubina directa \u003d bilirubina legata + bilirubina delta
Citiți mai jos despre proprietăți și valoarea diagnosticului.
Surse de formare a bilirubinei
Aproape singura sursă de origine a bilirubinei din organism este heme.
Heme este o structură care, la fel ca bilirubina, include patru inele pirol și, în plus, un atom de fier. Hemul face parte din molecule hemoglobină (proteină de celule roșii din sânge care transportă oxigen), o proteină musculară contractilă mioglobina și enzime celulare citocromi.
Principalul flux de eritrocite de bilirubină (85% din cantitatea totală) se formează în procesul de utilizare a hemoglobinei eritrocitelor din sânge depășite (aproximativ 120 de zile). Aceste celule roșii din sânge sunt extrase din fluxul sanguin și sunt distruse în principal în splină, dar și în ficat și măduva osoasă. O creștere a bilirubinei de origine eritrocitară are loc odată cu hemoliza (acesta este numele decăderii masive a eritrocitelor).
Alte surse dau naștere așa-numitelor. manevră bilirubină, care reprezintă până la 15% din cantitatea sa totală. Printre sursele bilirubinei de șunt sunt:
- Eritrocitele defecte și precursorii lor imaturi. Astfel de celule, ca urmare a respingerii constante, mor la scurt timp după naștere, fără a avea timp să părăsească „incubatorul” celulelor sanguine - măduva osoasă. Numărul de astfel de celule și, în consecință, cantitatea de bilirubină de șunt crește brusc în unele boli ereditare, autoimune, tumorale ale sistemului sanguin. În condiții normale, măduva osoasă produce nu mai mult de 7% bilirubină.
- O mică cantitate de bilirubină se formează în timpul reînnoirii și distrugerii constante a proteinei musculare mioglobinei. Cu toate acestea, leziunile însoțite de distrugerea extinsă a țesutului muscular pot duce la o creștere pe termen scurt a nivelului de bilirubină din sânge.
- O parte nesemnificativă a bilirubinei provine, de asemenea, din toate țesuturile corpului ca urmare a descompunerii citocromilor și a unor proteine \u200b\u200bcare nu conțin hem, în special peroxidaze.
După cum se arată în studiile densitometrice care utilizează glicină marcată radioactiv, hemul care dă naștere la bilirubină de șunt există nu mai mult de 10 zile. În același timp, durata existenței hemului eritrocitelor normale coincide cu durata de viață a eritrocitelor în sine - 120 de zile. Cunoscând proporția de bilirubină de șunt în concentrația sa totală, se poate judeca natura procesului bolii, dar până acum o astfel de analiză este disponibilă doar în cercetarea științifică.
Transformarea hemului în bilirubină, printre multe alte sarcini, este ocupată macrofage tisularecare fac parte din sistemul imunitar al organismului. Macrofagele tisulare se găsesc în toate organele, de obicei localizate în țesutul lor conjunctiv, dar sunt concentrate în principal în splină, ganglioni limfatici, ficat și măduva osoasă. Toate macrofagele tisulare își urmăresc descendența din monocitele crescute în matricea hematopoietică a măduvei osoase, dar în diferite organe sunt specializate pentru a îndeplini sarcini speciale și, prin urmare, au nume speciale - de exemplu, celulele Kupffer ale ficatului, histiocitele splinei, etc. Anterior, sistemul macrofagelor tisulare se numea sistem reticuloendotelial, dar acum acest termen este depășit.
- 80% din bilirubină este produsă de celulele Kupffer din ficat
- restul - macrofage ale măduvei osoase și ale splinei
- cantitate foarte mică - histiocite de țesut conjunctiv ale tuturor organelor
În fiecare zi, în corpul uman, 2 * 10 8 eritrocite în vârstă sunt distruse. În acest caz, se eliberează 6-8 g de hemoglobină, din care, la rândul său, provin 250-350 μg de bilirubină.
Hemul eliberat este absorbit de macrofage, după care este convertit cu participarea enzimei intracelulare hem oxigenază într-o substanță intermediară biliverdin... În același timp, un atom de fier și monoxidul de carbon sunt despărțiți de hem. Biliverdin, având o culoare verde, aparține substanțelor pigmentare. În plus, spre deosebire de bilirubină, este foarte solubilă în apă.
În a doua etapă a clivajului hemului cu ajutorul enzimei biliverdin transferază, biliverdina este transformată în bilirubină - o substanță pigmentară galben-portocalie insolubilă în apă. După cum știți, fiecare moleculă de hemoglobină conține patru unități de hem. În consecință, atunci când o moleculă de hemoglobină este clivată, se formează patru molecule de bilirubină și patru atomi de fier.
După cum sa menționat deja, monoxidul de carbon (CO) este eliberat ca un produs secundar al distrugerii legăturilor de carbon ale hemului și aceasta este singura reacție din organism care produce această substanță. Această circumstanță este utilizată într-o metodă de cercetare promițătoare: prin măsurarea concentrației de monoxid de carbon în aerul expirat, se poate estima rata de descompunere a hemului în organism.
Conversia secvențială a hemului în biliverdină verde, apoi în bilirubină galben-roșie, explică schimbarea culorii vânătăilor după vânătăi de la albastru închis la albastru-verde și apoi la galben.
Inițial, numai bilirubina liberă se formează în organism. Bilirubina legată apare ulterior ca urmare a transformării bilirubinei libere.
Proprietăți de bilirubină gratuită
Deci, în corpul nostru există un transportor care funcționează constant pentru producerea de bilirubină liberă ca parte a mecanismului fiziologic pentru înlocuirea celulelor roșii din sânge vechi. Acest lucru ridică mai multe probleme greu de rezolvat:
- Bilirubina liberă este o substanță toxică și, prin urmare, este necesar un mecanism fiabil pentru eliminarea sa din organism și menținerea concentrației sale la un nivel scăzut sigur. Toxicitatea bilirubinei se manifestă în primul rând în raport cu țesutul cerebral. Chiar și un nivel moderat ridicat de bilirubină liberă se manifestă prin simptome neexprimate ale sistemului nervos: slăbirea atenției, oboseală etc. Cu toate acestea, la adulți, concentrația de bilirubină liberă nu atinge niciodată un nivel atât de periculos încât să provoace daune sistemului nervos. Dar la nou-născuți, acest lucru se întâmplă. În special, conflictul imunologic poate duce la hemoliză masivă și la dezvoltarea așa-numitelor. icter „nuclear”. În același timp, bilirubina liberă, al cărei nivel din serul sanguin poate crește de zece ori și ajunge la 300 μmol / L și mai mult, se acumulează în țesutul cerebral, provocând modificări ireversibile în nucleii subcorticali ai creierului.
- Bilirubina liberă este practic insolubilă în apă. Deoarece toate fluidele biologice ale corpului sunt soluții apoase, bilirubina liberă nu poate fi îndepărtată din corp în forma în care se află, fără a-și schimba structura chimică.
- În același timp, bilirubina liberă este ușor solubilă în grăsimi. Datorită acestei proprietăți, depășește cu ușurință membranele fosfolipidice ale așa-numitelor. bariera hematoencefalică, concepută pentru a proteja țesutul cerebral de pătrunderea a numeroase substanțe toxice care circulă în sânge în el.
În fluxul sanguin, bilirubina liberă este transportată de proteinele albuminei, păstrând-o pe suprafața lor. 1 g de albumină transferă 8,5 mg de bilirubină. Complexul albumină-bilirubină este fragil și se dezintegrează cât mai curând posibil.
Reacția Van den Berg identifică bilirubina liberă ca fiind indirectă.
Bilirubina ca antioxidant
În lumina ultimelor cercetări, conceptul tradițional al bilirubinei ca produs unic de „zgură” s-a schimbat oarecum. Bilirubina liberă are proprietăți antioxidante pronunțate, iar organismul le folosește activ.
Activitatea antioxidantă a bilirubinei este semnificativ mai mare decât cea a α-tocoferolului (vitamina E), care este considerat un antioxidant clasic. Astfel, bilirubina inactivează H2O2 într-o concentrație care este de 10 ori mai mare decât a sa. În special, previne peroxidarea lipidică a membranelor celulare, precum și oxidarea proteinelor de membrană. Proprietățile antioxidante ale bilirubinei sunt cele mai semnificative în raport cu țesutul nervos și mușchiul inimii, deoarece aceste țesuturi nu au o autoapărare suficient de puternică împotriva radicalilor liberi.
S-a constatat că persoanele cu niveluri cronice ridicate de bilirubină liberă sunt mult mai puțin susceptibile de a se îmbolnăvi de ateroscleroza vaselor și de bolile cardiace asociate. S-a dovedit o relație inversă între nivelul bilirubinei libere din sânge și patologia cardiacă.
Un studiu efectuat pe 10.000 de pacienți a constatat că persoanele cu niveluri ridicate de bilirubină liberă au avut decese mai mici prin cancer.
În lumina acestor date, transformarea biliverdinului, ușor solubilă în apă, în bilirubină insolubilă „incomodă” pare a fi oportună.
Conversia bilirubinei libere în legată
Deoarece, așa cum s-a menționat mai sus, bilirubina liberă este insolubilă în apă, eliminarea sa din organism este imposibilă fără transformarea preliminară în alte substanțe solubile în apă.
Locul specific unei astfel de transformări este principala unitate structurală a ficatului - celula hepatică sau hepatocitul. Hepatocitele sunt colectate în lobuli hepatici. Lobulul hepatic este aranjat în așa fel încât fiecare celulă hepatică pe o parte să aibă contact cu un capilar sanguin venos (așa-numitul sinusoid), iar pe de altă parte, i se aduce un capilar biliar.
Bilirubină liberă, transportată pe suprafața albuminei, din sângele venos, sinusoidul se deplasează mai întâi în spațiul Disse, separând celula capilară și celulă hepatică, iar apoi prin membrana celulară în hepatocit, eliberându-se în același timp de legătura cu albumina. Această mișcare are loc fără consum de energie datorită diferenței de concentrație.
În interiorul celulei, bilirubina este legată reversibil de proteinele ligandinei. Ligandinele împiedică bilirubina să scape înapoi în capilarul venos și, de asemenea, o transportă către structura reticulară - reticulul endoplasmatic.
În reticulul endoplasmatic există așa-numitele. microsomii sunt vezicule umplute cu enzime. Pe suprafața microzomilor, cu participarea catalitică a enzimei glucuroniltransferază, apare reacția combinației bilirubinei libere cu acidul glucuronic, în urma căreia apare o substanță nouă - bilirubină legată sau conjugată.
Această reacție poate avea loc în unul sau două cicluri, oferind, respectiv, un monoglucuronid sau un biglucuronid de bilirubină. Raportul dintre monoglucuronide și biglucuronide este de 4: 1.
Gluuronizarea bilirubinei este unul dintre „blocajele” în metabolismul său, deoarece este limitată de cantitatea enzimei glucuronil transferază. Această cantitate este redusă brusc (mai puțin de 1-3% din normă) cu unele boli ereditare, în special cu.
Eliberarea obstrucționată a bilirubinei legate în bilă duce la acumularea acesteia în sânge. În astfel de cazuri, rinichii sunt obligați să își asume funcția de a-l elimina din corp, deși în condiții normale nu o fac. Apariția bilirubinei în urină este un semn al unei boli grave.
Proprietățile bilirubinei legate
Bilirubina legată cu proprietățile sale se compară favorabil cu bilirubina liberă:
- este netoxic
- bine solubil în mediu apos
- ușor excretat din organism, în principal cu bilă și, dacă este necesar, cu urină.
Bilirubina legată participă la reacția directă Van den Berg, prin urmare se numește de obicei bilirubină directă.
De asemenea, trebuie remarcat proprietatea proastă a bilirubinei legate: cu concentrația sa excesivă în bilă, este predispusă la cristalizare și la formarea de pietre de bilirubină în vezica biliară. Deoarece concentrația ridicată de bilirubină legată este o consecință a formării crescute de bilirubină liberă în organism, cauzele unor astfel de afecțiuni sunt de obicei alte boli ale sistemului sanguin.
Rolul decisiv al ficatului în metabolismul bilirubinei
Astfel, singurul organ din corpul uman care este capabil să transforme bilirubina liberă în bilirubină legată este ficatul.
Rolul decisiv al ficatului în metabolismul bilirubinei este și mai evident atunci când considerăm că 80% din bilirubina liberă este produsă și în ficat de către celulele Kupffer. Nivelul bilirubinei este unul dintre cei mai fiabili indicatori ai stării funcționale a ficatului, deoarece aproape întregul proces de metabolism al bilirubinei este strâns legat de această funcție.
Îngrijirea utilizării bilirubinei nu este atribuită accidental ficatului, care este numit pe bună dreptate principalul laborator chimic al corpului. Ficatul se transformă în substanțe chimice netoxice formând o cantitate imensă de substanțe, ambele formate în mod natural în organism și pătrunzând în exterior din acesta, inclusiv substanțe medicinale.
Unele produse finale metabolice sunt excretate în principal prin rinichi cu urină, altele prin ficat cu bilă. Care dintre cele două căi este preferabilă pentru fiecare substanță specifică se datorează particularităților structurii sale chimice și fiziologiei ficatului și rinichilor. Principiul general este următorul: rinichii sunt buni la îndepărtarea substanțelor cu o greutate moleculară mai mică de 300 cu. Adică restul sunt excretate în principal cu bilă, inclusiv bilirubină.
Trebuie spus că pentru procesarea bilirubinei, celula hepatică folosește sisteme enzimatice universale, care, împreună cu bilirubina, sunt implicate în metabolismul multor alte substanțe. Alături de economisirea resurselor organismului, această situație duce uneori la consecințe negative. Faptul este că o serie de substanțe, în special multe medicamente, concurează cu bilirubina în reacțiile enzimatice și, în caz de supradozaj, sunt capabile să le elimine complet din procesul metabolic. Acest lucru duce la acumularea de bilirubină indirectă în organism și la dezvoltarea așa-numitelor. icter „neconjugat”. Aceste medicamente includ paracetamol și alte analgezice nesteroidiene, unele antibiotice.
Bilirubina legată este eliberată din hepatocit în capilarul biliar și excretată cu bilă în intestin. Eliberarea de bilirubină legată în capilarul biliar necesită cheltuială energetică, prin urmare, deteriorarea celulelor hepatice în hepatită, ciroză etc. duce la defalcarea acestui proces.
Transformarea bilirubinei în intestin și a produselor sale
Astfel, bilirubina legată este eliberată odată cu curgerea bilei în intestine. Bilirubina conferă bilei o nuanță verde murdară.
Deoarece microorganismele care trăiesc în intestin lucrează activ la conținutul său, bilirubina suferă, de asemenea, o transformare suplimentară. În timpul procesării bilirubinei în intestin, se formează numeroși intermediari. Procesul de procesare a bilirubinei în intestin este în mai multe etape și are loc cu formarea a numeroase substanțe intermediare.
Principalele etape ale transformării intestinale:
- Sub influența enzimei bacteriene β-glucuronidază, bilirubina conjugată suferă hidroză (clivaj) cu formarea de bilirubină liberă
- Ca urmare a unei serii de reacții de reducere, bilirubina liberă este transformată într-un număr de substanțe sub denumirea generală de „urobilinogeni” sau „urobilinoizi”. În centrul urobilinogenilor, la fel ca bilirubina, se află o structură de patru inele pirol. Urobilinogenii sunt incolori.
Dintre urobilinogeni, cele mai importante sunt următoarele substanțe:
- mezobilinogen - strămoșul grupului urobilinogen
- stercobilinogen
- urobilinogen în sine
Majoritatea urobilinogenilor se transformă în cele din urmă în produsele pigmentare finale - stercobilină și urobilină, care au o culoare portocaliu-maroniu. Aceste substanțe conferă fecalelor culoarea caracteristică. Decolorarea fecalelor indică absența bilirubinei în acestea, ceea ce se întâmplă cu hepatita sau când tractul biliar este blocat. 10-20% dintre urobilinogeni sunt absorbiți din intestin și se întorc în ficat prin sistemul venei porte. Ficatul face cu ei ceea ce poate: se traduce prin bilirubină legată și o trimite înapoi în intestine. În mod normal, nu mai mult de 2-5% dintre urobilinogeni sunt excretați în urină. O cantitate atât de mică nu este detectată într-un test de urină de laborator de rutină.
În hepatită, ficatul nu poate face față utilizării urobilinogenilor, în urma cărora se găsesc în urină. - un semn diagnostic important al bolii hepatice.
Reacția Van den Berg și alte metode de determinare a bilirubinei
Acum este momentul să explicăm originea unor nume ciudate: bilirubina „directă” și „indirectă”. Și acesta este numele dat celor două forme de bilirubină din mâna ușoară a domnului Van Den Berg, care a dezvoltat în 1916 reacția pentru identificarea bilirubinei în serul de sânge folosind reactivul lui Ehrlich. După 100 de ani, reacția, numită după el reacția Van den Berg, rămâne în practica de laborator principala metodă de studiere a conținutului de bilirubină.
Fără a intra în detaliile metodei, care a suferit numeroase modificări de-a lungul a o sută de ani, observăm caracteristica sa fundamentală - implementarea în două etape:
- Primul pas (reacția directă a lui Van den Berg): Reactivul Ehrlich este adăugat la eprubetă cu serul din sânge. În curând, dacă există bilirubină legată în ser, conținutul tubului capătă o culoare roz aprins. Bilirubina liberă blocată de albumină nu ia parte la reacție. Cu ajutorul unui dispozitiv colorimetric, cantitatea de bilirubină legată poate fi cuantificată prin intensitatea culorii. Astfel, bilirubina legată, care ia parte la o reacție directă, se numește bilirubină „directă”.
- A doua fază (reacție indirectă a lui Van den Berg): mai întâi adăugați o substanță care precipită albumina într-un alt tub cu serul testat. În versiunea originală a Van den Berg, alcoolul etilic 96˚ a fost utilizat în acest scop. Ulterior, alcoolul etilic a fost înlocuit cu substanțe mai eficiente. În același timp, albumina se așează la baza tubului, iar bilirubina liberă deblocată capătă capacitatea de a intra într-o reacție chimică cu reactivul Ehrlich, ceea ce face. Concomitent cu bilirubina indirectă, bilirubina directă (dacă există) participă și ea la reacție, adică reacția indirectă a lui Van den Berg determină bilirubina totală ca suma bilirubinei directe și indirecte. Conținutul bilirubinei indirecte se calculează ca diferență între bilirubina totală și cea directă:
bilirubina indirecta \u003d bilirubina totala - bilirubina directa
Reacția Van den Berg, împreună cu avantaje neîndoielnice, inclusiv simplitatea implementării și claritatea rezultatului, prezintă, de asemenea, un dezavantaj semnificativ - oferă un conținut supraestimat de bilirubină directă. Deci, în serul persoanelor sănătoase, această metodă detectează până la 5,4 μmol / l de bilirubină directă, care reprezintă până la 25% din total. De fapt, după cum se arată prin metode mai precise, la aceste persoane, bilirubina totală este aproape 100% indirectă, iar directă este practic absentă. Cu toate acestea, în practica clinică, este mai important să se cunoască nu conținutul de bilirubină în sine, ci dinamica acestuia, pentru care este necesar să se asigure comparabilitatea rezultatelor obținute în momente diferite și în diferite laboratoare.
- α - bilirubină liberă
- β - bilirubină monoglucuronidă
- λ - bilirubină biglucuronidă
Au fost dezvoltate alte metode de detectare a bilirubinei, a căror descriere detaliată depășește sfera acestui articol:
- spectrofotometrie
- analizor de gaze
- cromatografie lichidă de înaltă performanță
- metoda neinvazivă - densitometrie reflexivă
Cromatografia lichidă de înaltă performanță este cea mai promițătoare dintre aceste metode. Această tehnică vă permite să determinați conținutul a patru fracții de bilirubină:
- α - bilirubină liberă
- β - bilirubină monoglucuronidă
- λ - bilirubină biglucuronidă
- δ - delta-bilirubină sau biliproteină
Delta bilirubinei
Delta bilirubinei este o combinație de bilirubină conjugată (biglucuronid sau bilirubină monoglucuronid) cu albumină. Un alt nume pentru această substanță este adesea folosit în literatura științifică: „biliproteină”. Această substanță este de culoare galbenă.
Reacția Van den Berg nu permite determinarea separată a delta-bilirubinei și o identifică împreună cu glucuronidele bilirubinei ca fiind directe, deoarece toate aceste substanțe reacționează direct cu reactivul Ehrlich într-un mod similar. Cromatografia lichidă de înaltă performanță este utilizată pentru a determina selectiv conținutul său în serul sanguin.
În aspectele biochimice și fiziologice, delta-bilirubina are o serie de caracteristici care, în general, fac posibilă considerarea acesteia, alături de bilirubina liberă și legată, ca o a treia formă independentă de bilirubină:
- Spre deosebire de complexul albuminei cu bilirubină liberă, delta-bilirubina este o substanță destul de stabilă, deoarece componentele sale sunt legate ireversibil de legături chimice covalente puternice.
- Sinteza moleculei delta-bilirubină nu necesită participarea elementelor intracelulare, prin urmare, este posibilă in vivo și in vitro, adică atât în \u200b\u200bcorp, cât și în eprubetă.
- Delta bilirubinei este netoxică pentru țesuturile corpului.
- Datorită masivității excesive a moleculei sale, delta-bilirubina într-o formă nemodificată nu este complet excretată din organism, nici cu bilă, nici prin rinichi.
- S-a stabilit că timpul de înjumătățire al deltei-bilirubinei din organism este același cu cel al albuminei obișnuite și este de 14-21 de zile. Numai după distrugerea albuminei devine posibilă îndepărtarea din organism a glucuronidului bilirubinic combinat anterior cu acesta, în principal cu bilă.
Delta bilirubinei nu se găsește în cantități semnificative în condiții normale. Conținutul său crește brusc odată cu colestaza, adică o încălcare a producției și excreției componentelor biliare pe fundalul funcției conservate a sintezei bilirubinei conjugate. Colestaza poate fi atât intrahepatică în hepatită și ciroză hepatică, cât și extrahepatică, datorită obstrucției scurgerii bilei în căile biliare extrahepatice, care se întâmplă de obicei atunci când sunt blocate de calculii biliari.
Conținutul de delta-bilirubină în colestază poate ajunge la 60-70 și chiar la 90% din direct. Datorită „vitalității” sale în organism, delta-bilirubina (și, în același timp, bilirubina directă în general) rămâne ridicată încă 1-1,5 săptămâni după normalizarea scurgerii bilei. Acest lucru explică fenomenul anterior de neînțeles când bilirubina directă rămâne ridicată mult timp, în ciuda îmbunătățirii clinice evidente și a normalizării altor parametri de laborator, în special.
În același timp, nu există o creștere a conținutului de delta-bilirubină în hiperbilirubinemia neconjugată (acumularea de bilirubină neconjugată în sânge, ceea ce se întâmplă în alte condiții).
Lumirubină și alte fotoproduse de bilirubină
În configurația sa obișnuită și cea mai stabilă, molecula de bilirubină este pliată în așa fel încât unele grupuri active sunt blocate de altele, ceea ce determină insolubilitatea acesteia. Sub influența luminii albastre, bilirubina se poate transforma în numeroase fotoproduse, dintre care majoritatea, datorită grupărilor hidroxil deblocate, sunt foarte solubile în apă.
La un moment dat, chimiștii au devenit interesați de solubilitatea paradoxală a bilirubinei libere. Teoretic, molecula de bilirubină, datorită prezenței a două grupări hidroxil COOH - ar trebui să aibă o polaritate pronunțată. După cum știți, substanțele cu o moleculă polarizată sunt solubile în apă și insolubile în grăsimi. De fapt, bilirubina liberă se comportă în sens opus.
Enigma a fost rezolvată cu ajutorul cristalografiei cu raze X. S-a dovedit că molecula de bilirubină liberă are o configurație spațială în care grupările hidroxil polarizante sunt blocate de legături inter-hidrogen interne (așa-numitele legături Z-Z). Această configurație a moleculei de bilirubină este cea mai stabilă și de bază, deoarece are un spațiu și o energie minime. S-a constatat, de asemenea, că există numeroase alte opțiuni pe lângă configurația de bază.
Cel mai mare interes dintre ei merită produse fotografice bilirubina, care se formează atunci când sunt expuse la lumina albastră în prezența oxigenului atomic. Moleculele de bilirubină, absorbind energia fotonilor de lumină, schimbă legăturile interatomice interne Z-Z în legături Z-E și E-E cu energie mai mare. În acest caz, împreună cu o schimbare a configurației spațiale a moleculelor, proprietățile lor se schimbă și ele radical - ele devin solubile în apă.
Datorită solubilității lor bune în apă, produsele foto sunt excretate rapid din corp de către ficat. Unul dintre fotoprodusele cu legături E-E, numit lumirubină... Produsele fotografice au o durată de viață scurtă, deoarece astfel de molecule scapă de excesul de energie cât mai curând posibil și revin la configurația lor originală, de bază.
Capacitatea bilirubinei libere de a forma fotoproduse solubile în apă este utilizată pentru a trata icterul neonatal prin fototerapie.
Citiți continuarea:
VAN DEN BERGA REACTION
(a. a. n. van den bergh, 1869-1943, medic danez) o metodă pentru determinarea calitativă și cantitativă a bilirubinei în serul sanguin, bazată pe apariția unei culori roșii sau roz atunci când interacționează cu diazo-reactivul lui Ehrlich; determinarea cantitativă se realizează colorimetric.
Termeni medicali. 2012
A se vedea, de asemenea, interpretări, sinonime, semnificații ale cuvântului și ce este VAN-DEN-BERGA REACTION în limba rusă în dicționare, enciclopedii și cărți de referință:
- REACŢIE în Dicționarul de termeni economici:
(argou.) - aici: o scădere rapidă a prețurilor după ... - VAN
Van - - VAN în Manualul personajelor și obiectelor de cult ale mitologiei grecești:
titlul de conducători ai statelor și principatelor din China și Coreea în antichitate și mijloc ... - REACŢIE în termeni medicali:
(reactio; re- + lat. actio action; sinonim al lui r. psychogenic) în psihiatrie, denumirea generală a modificărilor patologice în activitatea mentală care apar ca răspuns ... - REACŢIE
(din re ... și lat. actio - acțiune) acțiune, stare, proces care apare ca răspuns la orice ... - DEN în marele dicționar enciclopedic:
(Dehn) Siegfried Wilhelm (1799-1858) teoretician și educator al muzicii germane. Autor al manualelor despre armonie și contrapunct. Au luat lecții de la M. I. ... - VAN în marele dicționar enciclopedic:
oraș din estul Turciei, pe malul estic al lacului. Wang, centrul administrativ al Il Wang. 153 mii locuitori (1990). Măcinarea făinii, industria cimentului. ... - REACŢIE
Reacție (polit.) - în sens larg, înseamnă o mișcare socială într-o direcție extrem de opusă celei anterioare sau moderne, dacă este cauzată de extremele sale. Asa de … - DEN în Dicționarul enciclopedic al lui Brockhaus și Euphron:
(Dheune) - un râu din estul Franței, lung de 65 km, al cărui canal face parte din ... - DEN în Dicționarul enciclopedic al lui Brockhaus și Euphron:
(Siegfried-Wilhelm Dehn) - celebru teoretician al muzicii germane (1796-1858); a studiat mai întâi violoncelul, apoi teoria compoziției sub îndrumarea lui Klein. Mare ... - PARTICULĂ VAN în Dicționarul enciclopedic al lui Brockhaus și Euphron:
o particulă care uneori constituie un prefix la numele de familie olandez derivate de la numele unei localități; este adesea scrisă împreună cu prenumele în sine. Corespondent ... - VAN TURKISH VILAYET în Dicționarul enciclopedic al lui Brockhaus și Euphron:
(Van) - Vilayetul turcesc din sud-estul Armeniei, denumit de obicei Kurdistan, este format din Sanjaks: Van (cu 233269 locuitori), Mush și ... - VAN TITULE în Dicționarul enciclopedic al lui Brockhaus și Euphron:
(Chinezul wang, gan, khan) corespunde prințului nostru. Acest titlu este ereditar și are mai multe grade. Când autoritățile îl contactează, atunci ... - VAN în Dicționarul enciclopedic al lui Brockhaus și Euphron:
(balenă, wang, gan, khan) corespunde prințului nostru. Acest titlu este ereditar și are mai multe grade. Când autoritățile îl contactează, atunci ... - BERGA în Dicționarul enciclopedic al lui Brockhaus și Euphron:
(Berga) - munți. în Catalonia, centru administrativ, la 718 m deasupra nivelului. mare, pe afluentul drept al râului. Liebregat, 4996 locuitori, angajați în ... - REACŢIE
(din re ... și actio latină - acțiune), acțiune, stare, proces care apare ca răspuns la orice ... - VAN în Dicționarul enciclopedic modern:
titlul de conducători ai statelor și principatelor din China și Coreea în antichitate și mijloc ... - REACŢIE
[latin re. împotriva + actio action] 1) acțiune care apare ca răspuns la o anumită acțiune; 2) în biologie, răspunsul este ... - VAN în Dicționarul enciclopedic:
titlul de conducători ai statelor și principatelor din China și Coreea în antichitate și mijloc ... - REACŢIE în Dicționarul enciclopedic:
Eu și, f. 1. O acțiune care are loc ca răspuns la un anumit impact. Pozitiv p. la critică. 2. Răspunsul corpului ... - REACŢIE în Dicționarul enciclopedic:
1, -i, g. Eu văd cum reacționează. 2. Transformarea unor substanțe în altele (reacție chimică) sau transformarea nucleelor \u200b\u200batomice datorită ... - REACŢIE
Reacția de sedimentare a eritrocitelor, vezi ROE ... - REACŢIE în marele dicționar enciclopedic rusesc:
REACȚIUNEA RADIAȚIEI, la fel ca fricțiunea radiației ... - REACŢIE în marele dicționar enciclopedic rusesc:
RĂSPUNS Rezistența politică, activă a societăților. progres pentru a păstra și a consolida societățile sociale depășite ... - REACŢIE în marele dicționar enciclopedic rusesc:
REACȚIE (din re ... și lat. Astio - acțiune), acțiune, stare, proces care apare ca răspuns la K.-L. ... - DEN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
Yves. Yves. (1786-1859), Rus. inginer-fortificator, inginer-general (1843), chl. Stat consiliu (1850). Din 1831 cap. constructor de cetăți în Regatul Poloniei (sub ... - DEN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
(Dehn) Siegfried Wilhelm (1799-1858), it. muze. teoretician și profesor. Autor al manualelor despre armonie și contrapunct. D. a luat lecții de la M.I. Glinka, ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
YANMIN (Wang Shouren) (1472-1529), China. filosof-neo-confucianist, scriitor, stat. activist. El a pornit de la unitatea cunoașterii și acțiunii în morală. comportament și argumentat ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
EIKE (van Eyck), Olanda. pictori, fondatori ai Olandei. arta secolului al XV-lea, frați: Hubert (c. 1370-1426) poate că a început „Retaul din Ghent”. Ianuarie (c ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
SHUKHE (210-285), China. doctor. In carte. „Pe puls” (v. 1-10, 280) a subliniat doctrina diagnosticului său. și prognostic. valoare. Munca ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
CHUN (27 - c. 104), balenă. filozof. Principal op. „Raționamentul de cântărire” („Lun Heng”) combină ideile confucianismului și taoismului, impregnate de raționalism ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
HYES (Van Hise) Charles Richard (1857-1918), Amer. geolog. Principal tr. despre Precambrian al Scutului Canadian și probleme ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
FLEK (Van Vleck) John Hazbrook (1899-1980), Amer. fizician. Fond. tr. pe teoria cuantică a magnetismului și a televizorului. corp. Nimeni. etc. ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
Tigem F.E.L., vezi Tigem F.E.L. ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
T'AO (1828-97), unul dintre predecesorii ideologici ai mișcării de reformă din China (vezi „O sută de zile de reforme”). Traducător și publicist. Tr. despre … - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
XIAONG (1857-1918), China. actor și dramaturg. Servit în decomp. t-rah țări. Cel mai bun rol - poetul Li Bo în piesa „Wandering ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
XIANZHI (? -878), una dintre mâini. Cruce. războaie 874-901 în China. În 878 armata sa a fost înfrântă, el însuși ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
SWITEN (van Swieten) Gerard (1700-72), Olanda. doctor. Din 1745 a lucrat la Viena, fondatorul așa-numitelor. vechea școală vieneză, în. och. h ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
MIN (Chen Shaoyu) (1904-74), membru. Politburo al Comitetului Central și al secretarilor. Comitetul central al CP al Chinei (CPC) în 1931-45. În 1931 acționa ca general. ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
MAN (45 BC-23 AD), imp. China din 9 d.Hr. (ca urmare a unei lovituri de stat la palat). El a încercat să efectueze reforme (lichidarea proprietății private ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
ECUAȚIA DER VAALS propusă de J.D. Van der Waals (1873) urgența stării unui gaz real, luând în considerare finețea volumului moleculelor și prezența intermolului. ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
DER V ВAALS (van der Waals) Johannes Diederik (1837-1923), Olanda. fizician. Derivat starea ur a statului pentru gaze reale (ur-nie V. der V.) ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
DIKE (van Dyck, van Dijck) Anthony (1599-1641), flam. pictor. A lucrat și în Italia și Anglia. Elev P.P. Rubens. Virtuos în ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
DE GŔAAFA GENERATOR, vezi Generator electrostatic ... - VAN în marele dicționar enciclopedic rusesc:
DAMM (Van Damme; real fam. Van Varenburg, van Varenburg) Jean-Claude (n. 1961), belg. actor de film. Trăiește și lucrează în SUA. Campion ...
