การวินิจฉัยวัณโรคในเด็ก

ฉัน PIDLYTKIV

Bogdanova E.V., Kiselevich O.K.

ภาควิชา Phthisiopulmonology มหาวิทยาลัยการแพทย์แห่งรัฐรัสเซีย

ความหลากหลายของอาการทางคลินิกเฉพาะและความหลากหลายของอาการทางคลินิกของวัณโรคในเด็กทำให้ยากต่อการวินิจฉัยโรค ดังนั้นวิธีการหลักในการวินิจฉัยวัณโรคในระยะเริ่มแรกคือการรักษาผู้ป่วยอย่างครอบคลุมโดยแพทย์ผู้เชี่ยวชาญ

การระบุตัวเด็กที่ต้องการคำปรึกษาจากแพทย์ผู้เชี่ยวชาญด้านการแพทย์จะจัดการโดยกุมารแพทย์ในคลินิกผู้ป่วยนอกและในโรงพยาบาล กุมารแพทย์จำเป็นต้องทราบกลุ่มเสี่ยงต่อการเกิดวัณโรคในเด็กและวัยรุ่น เด็กและเด็กจากกลุ่มเหล่านี้จะถูกส่งต่อไปยังกุมารแพทย์ทันทีเพื่อขอคำปรึกษา นอกจากนี้กุมารแพทย์ยังต้องทำการวินิจฉัยแยกโรควัณโรคและโรคอื่นๆ อีกด้วย

การวินิจฉัยวัณโรคในเด็กเป็นเรื่องยาก อาการทางคลินิกจะแตกต่างกันไป แต่ไม่มีรูปแบบเฉพาะเจาะจง วัณโรคในเด็กมักเกิดขึ้นภายใต้หน้ากากของโรคต่างๆ - HRV, หลอดลมอักเสบ ฯลฯ

ในการวินิจฉัยวัณโรคแพทย์ phthisiat ใช้วิธีการผูกมัดที่ซับซ้อน - ขั้นต่ำการวินิจฉัยหอดูดาว (ODM) ซึ่งรวมถึง:

1. การรำลึก: การระบุเชื้อโรคและพยาธิสภาพของการติดเชื้อในเด็ก การระบุปัจจัยทางการแพทย์และสังคมที่ไม่เอื้ออำนวย การประเมินพลวัตของความไวของวัณโรคโดยใช้การทดสอบ Mantoux ด้วย 2TE PPD-L

2. เปิดเผยสการ์ก ให้ความสนใจอย่างระมัดระวังต่อการสูญเสียความอยากอาหาร การนอนหลับไม่สนิท ความเหนื่อยล้า และความเหนื่อยล้า ในเด็กนักเรียน - ความจำลดลง, ความนับถือลดลง, ความสำเร็จลดลง, ปวดหัว; อุณหภูมิเพิ่มขึ้นและเข้า;

3. การตรวจสอบและวิธีการยึดทางกายภาพ

1) การติดตามผลเอ็กซ์เรย์ช่วยให้คุณเห็นภาพการเปลี่ยนแปลงของขาและ/หรือต่อมน้ำเหลืองในเต้านมซึ่งเป็นลักษณะของวัณโรคในรูปแบบต่างๆ ซึ่งหมายถึงการถ่ายภาพรังสีของอวัยวะหน้าอกทั้งแบบตรงและด้านข้าง ภาพเอกซเรย์ของพื้นที่ที่ได้รับผลกระทบ

2) การตรวจเลือดทางคลินิกทำให้สามารถตรวจพบสัญญาณของการเปลี่ยนแปลงได้ ด้วยวัณโรคที่ใช้งานอยู่มักจะมีการเพิ่มขึ้นของโรคโลหิตจางและ lymphopenia โดยมีวัณโรคขั้นสูง - เม็ดเลือดขาว, ความผิดปกติของปีกซ้าย, monocytosis, SPE เร่ง

3) การวิเคราะห์ภายนอกของส่วน การเปลี่ยนแปลงในการวิเคราะห์มีความเฉพาะเจาะจงและเมื่อรวมกับสัญญาณอื่น ๆ จะยืนยันกิจกรรมของกระบวนการวัณโรค

4) การตรวจติดตามเสมหะ สเมียร์จากผนังด้านหลังของคอหอยเพื่อตรวจหา MBT จะดำเนินการอย่างน้อย 3 ครั้งในช่วงระยะเวลา 3 วัน

5) การวินิจฉัยวัณโรคส่วนบุคคล (การทดสอบทิ่มผิวหนัง, การทดสอบ Mantoux พร้อมการเจือจางวัณโรคในโรงพยาบาล, การทดสอบ Koch) - ตามที่ระบุไว้

2 เกณฑ์ทางพยาธิวิทยา กระบวนการวัณโรค:

ฉัน. สาเหตุของวัณโรคคือ Mycobacterium tuberculosis (MBT)

การปรากฏตัวของ MBT ในวัสดุของผู้ป่วยบ่งบอกถึงความจำเพาะของกระบวนการทางพยาธิวิทยาในร่างกายของผู้ป่วย

การเลือกวัสดุสำหรับการตรวจสอบขึ้นอยู่กับรูปแบบทางคลินิกของวัณโรค ระยะของกระบวนการวัณโรค และอายุของโรค สิ่งที่ได้รับการตรวจสอบโดยทั่วไป ได้แก่ เสมหะ น้ำในหลอดลมและถุงน้ำคร่ำ อุจจาระ รอยบาก การตัดชิ้นเนื้อและวัสดุผ่าตัด สารหลั่งเยื่อหุ้มปอด ฯลฯ

เพื่อสรุปวิธีการตรวจสอบทางจุลชีววิทยาในปัจจุบัน:

1) วิธีการตรวจแบคทีเรีย :

การตรวจแบคทีเรียเป็นวิธีที่เร็ว ง่ายที่สุด และถูกที่สุดในการตรวจหาเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่เป็นกรด อย่างไรก็ตาม วิธีการส่องกล้องแบคทีเรียทำให้สามารถตรวจจับมัยโคแบคทีเรียที่ความเข้มข้นอย่างน้อย 5,000-10,000 ในวัสดุที่ทดสอบ 1 มิลลิลิตร การตรวจหาเชื้อมัยโคแบคทีเรียชนิดรวดเร็วเป็นกรดด้วยกล้องจุลทรรศน์ไม่อนุญาตให้แยกแยะวัณโรคจากเชื้อมัยโคแบคทีเรียชนิดผิดปรกติและชนิดซาโปรไฟติก

2) วิธีการเพาะเลี้ยง (การเพาะเลี้ยงบนเนื้อเยื่อที่มีชีวิต) ช่วยให้คุณสามารถตรวจจับ MBT ได้หากตรวจพบเซลล์จุลินทรีย์หลายสิบเซลล์ในวัสดุทดสอบ 1 มิลลิลิตร

อย่างไรก็ตาม การเจริญเติบโตของการเพาะเลี้ยง MBT บนอาหารเลี้ยงเชื้อหลอดเลือดดำแข็งจะคงอยู่ประมาณ 2-3 เดือน ในเวลานี้สารที่มีชีวิตหายากได้ถูกกำจัดออกไปแล้ว ซึ่ง MBT จะเติบโตเป็นเวลา 10-14 วัน สิ่งสำคัญอย่างยิ่งคือการประเมินที่ครอบคลุมของการตรวจสอบวัสดุที่ตรวจสอบซึ่งช่วยให้สามารถประเมินความรุนแรงของกระบวนการการพยากรณ์โรคและกำหนดวิธีการรักษาได้ วิธีการเพาะเลี้ยงทำให้สามารถแยกแยะ MBT จากเชื้อมัยโคแบคทีเรียประเภทอื่นได้ และกำหนดความไว/การดื้อยาของยา MBT ต่อยาต้านวัณโรค

3) วิธีการทางชีวภาพ - การติดเชื้อของสัตว์ทดลอง (โดยเฉพาะหนูตะเภาที่ไวต่อความรู้สึก) วิธีการนี้มีความไวสูงดังนั้นจึงช่วยให้คุณสามารถยกเลิกผลลัพธ์ที่เป็นบวกได้เนื่องจากในวัสดุที่ศึกษามีเชื้อมัยโคแบคทีเรียทีละตัว (1-5) ระยะเวลาการติดตามผลคือ 1.5-2 เดือน วิธีการนี้ใช้ได้เฉพาะในห้องปฏิบัติการของสถาบันวิจัยของรัฐบาลกลางเท่านั้น

ผิวหนังทนทุกข์ทรมานจากวิธีการนิ่ง ด้านบวกทั้งการแลกเปลี่ยนนี้และการแลกเปลี่ยนอื่น ๆ

การทดสอบวินิจฉัยและวินิจฉัยแยกโรคเพิ่มเติมสำหรับวัณโรค ได้แก่ การศึกษาทางภูมิคุ้มกันวิทยาและวิธีการทางอณูชีววิทยา วิธีการเหล่านี้ทำให้สามารถตรวจพบวัณโรคในขณะที่พลังชีวิตลดลงได้ วิธีการทางภูมิคุ้มกันช่วยให้ประเมินปฏิกิริยาของร่างกายผู้ป่วยระบุกิจกรรมของกระบวนการวัณโรคติดตามประสิทธิผลของการรักษาระบุความจำเป็นในการผ่าตัดรักษาและคาดการณ์เพิ่มเติม พลวัตของกระบวนการเฉพาะ

§ การจำแนกแอนติเจนและแอนติบอดีของ MBT ก่อนเริ่มเป็นวัณโรคโดยใช้การทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA)

§ การจำแนก DNA ของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis โดยใช้ปฏิกิริยาโพลีเมอเรส Lanczyg (PLR)

ครั้งที่สอง . องค์ประกอบของวัณโรคแกรนูโลมา ถูกเปิดเผยโดยวิธีการทางจุลพยาธิวิทยาในเอกสารการวิจัย

เมื่อเริ่มมีการตายของเนื้อร้ายที่เกิดจาก MBT จะเกิดปฏิกิริยาการจุดระเบิดแบบแห้ง: คลื่นของเซลล์เยื่อบุผิว, เซลล์ Pirogov-Langhans ขนาดยักษ์, การสะสมของเซลล์เม็ดเลือดขาว

ความเป็นไปได้ของการตรวจสอบทางสัณฐานวิทยานั้นสัมพันธ์กับความยากลำบากบางประการ เนื่องจากในกรณีที่วัณโรคทางคลินิกรุนแรงในเด็ก อาจไม่มีวัสดุทางพยาธิวิทยาสำหรับการตรวจสอบ

ดังนั้นสำหรับการวินิจฉัยโรคในเด็กตั้งแต่เนิ่นๆและถูกต้อง การประเมินข้อมูลทางคลินิก เอ็กซ์เรย์ และห้องปฏิบัติการที่ซับซ้อนจึงมีบทบาทหลัก

วิธีการพื้นฐานในการตรวจหาวัณโรคในเด็กและเด็ก

ปัจจุบันสามารถตรวจพบวัณโรคในเด็กและเด็กได้ด้วยวิธีดังต่อไปนี้

โอการวินิจฉัยวัณโรคมวล . ในการทดสอบแบบคัดกรองจำนวนมาก จะใช้การทดสอบ Mantoux ด้วย 2 TO tuberculin PPD-L

การวินิจฉัยวัณโรคมวลมีวัตถุประสงค์เพื่อ:

การตรวจหาวัณโรคในเด็กและเด็กในระยะเริ่มแรก

การป้องกันการติดเชื้อ MBT และความเสี่ยงของการติดเชื้อเบื้องต้น

การทดสอบ Tuberculin ไม่อนุญาตให้ตัดสินความแข็งแกร่งของภูมิคุ้มกันต้านวัณโรค

เด็กด้วย กลุ่มริซิกุ กับการพัฒนาวัณโรค ก่อนจัดกลุ่ม ให้นอนลง:

1. ติดเชื้อ MBT ครั้งแรก ข้อเท็จจริงของการติดเชื้อเบื้องต้นเกิดขึ้นจากปฏิกิริยาวัณโรค

2. บุคคลที่ติดเชื้อที่มีความรู้สึกไวต่อวัณโรคมากเกินไปซึ่งระบุโดยขนาดของการแทรกซึมตั้งแต่ 17 มม. ขึ้นไปการปรากฏตัวของปฏิกิริยาการตายของเนื้อร้ายแบบ vesiculobulous ที่บริเวณที่ฉีดวัณโรคภายใน inu

3. บุคคลที่ติดเชื้อ MBT มีความไวของวัณโรคเพิ่มขึ้น ความไวต่อวัณโรคที่เพิ่มขึ้นจะแสดงโดยการเพิ่มขนาดของการแทรกซึม 6 มม. หรือมากกว่าซึ่งเท่ากับหินด้านหน้า

4. บุคคลที่มีสาเหตุที่ไม่ชัดเจนของการแพ้วัณโรค - เนื่องจากในเวลานี้ดูเหมือนจะไม่สามารถระบุโภชนาการเกี่ยวกับสาเหตุของปฏิกิริยาเชิงบวกต่อวัณโรคได้ (หลังการฉีดวัคซีน? การติดเชื้อ?) ไม่มีเกณฑ์ที่แน่นอนสำหรับการวินิจฉัยแยกโรคหลังการฉีดวัคซีนและการแพ้จากการติดเชื้อก่อนวัณโรค บ่อยครั้งที่ลักษณะของปฏิกิริยาถูกกำหนดโดยกุมารแพทย์ภายใต้การดูแลแบบไดนามิก นอกเหนือจากขนาดของการแทรกซึมแล้ว การประเมินลักษณะบางอย่างยังถูกนำมาพิจารณาด้วย: ความเข้มของสี ความชัดเจนของรูปทรง และระยะเวลาในการคงสภาพผิวคล้ำไว้หลังจากการแทรกซึมได้ดับลงแล้ว

5. บุคคลที่ติดเชื้อ MBT เนื่องจากการทดสอบ Mantoux ด้วย 2 TO tuberculin PPD-L ดำเนินการอย่างไม่สม่ำเสมอ กลุ่มนี้ให้ความสำคัญเป็นพิเศษกับความจริงที่ว่าเด็กและเด็กมักป่วยและอาจมีอาการป่วยร่วมด้วย

โอการควบคุมเด็กเมื่อสัมผัสกับความเจ็บป่วยโดยทันที วัณโรค.

ด้วยความเคารพอย่างยิ่งที่มีการระบุหลักฐานการติดเชื้อในเด็กที่เป็นเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค เส้นทางการติดเชื้อในเด็กและเด็กขึ้นอยู่กับลักษณะของการติดเชื้อ

1. เส้นทางทางอากาศ - การติดต่อกับผู้ที่เป็นวัณโรคโดยเฉพาะแบคทีเรีย การติดเชื้อเกิดจากเชื้อชนิดใด?ม. วัณโรค

2. แนวทางโภชนาการ - การกินนมที่ติดเชื้อและผลิตภัณฑ์นมที่ยังไม่แปรรูปโดยใช้ความร้อนสำหรับผู้ป่วยวัณโรคในสัตว์ เอ็มติดเชื้อโบวิส

3. เส้นทางการติดต่อ - เมื่อ MBT ทะลุผ่านผิวหนังที่เสียหายและเยื่อเมือก ผลกระทบหลักในท้องถิ่นของอวัยวะเหล่านี้จะเกิดขึ้น

4. วิธีการข้ามรกนั้นหาได้ยาก รกมีบทบาทสำคัญในวัณโรคและท้องเสีย MBT ทะลุผ่านหลอดเลือดดำสะดือเข้าสู่ทารกในครรภ์ และมีความสำคัญในตับ ซึ่งอาจส่งผลต่อต่อมน้ำเหลืองพอร์ทัล การติดเชื้อเบื้องต้นอาจเกิดขึ้นที่ขาและอวัยวะอื่น ๆ ในระหว่างการสำลักและการแพร่กระจายของทารกในครรภ์ในบริเวณออนโคพลอยด์ที่ติดเชื้อ

เด็กส่วนใหญ่ โดยเฉพาะเด็กปฐมวัยและเด็กก่อนวัยเรียน ติดเชื้อ MTB ในครอบครัว อันตรายของการติดเชื้อในครอบครัวด้วยการติดเชื้อวัณโรคไม่เพียงเกิดจากการปนเปื้อนจำนวนมากเท่านั้น แต่ยังรวมถึงภาวะแทรกซ้อนด้วย การที่เด็กตั้งแต่เดือนแรกของชีวิตไปจนถึงการเจ็บป่วยด้วยวัณโรคในกรณีส่วนใหญ่จะนำไปสู่พัฒนาการของการเจ็บป่วย ตามกฎแล้ว ในกรณีเหล่านี้ เด็ก ๆ จะพัฒนาวัณโรคในรูปแบบทั่วไปและซับซ้อน

หากตรวจพบผู้ป่วยวัณโรคในประเทศบ้านเกิดจะติดต่อผู้ติดต่อทันที เด็กจะถูกส่งไปขอคำปรึกษาจากกุมารแพทย์เพื่อรับการรักษาเป็นเวลา 7-10 วัน (ODM) สำหรับเด็กแนวทางป้องกันที่สำคัญที่สุดคือการป้องกันการสัมผัสกับผู้ป่วยวัณโรค

โอความยับยั้งชั่งใจเมื่อเกิดจากอาการเจ็บป่วย

อาการเริ่มแรกของกระบวนการวัณโรคมีเพียงเล็กน้อย: ความอยากอาหารลดลง น้ำหนักตัวลดลง เหนื่อยล้า เหนื่อยล้า อุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นเป็นระยะจนถึงระดับไข้ย่อย เป็นต้น

เด็กตั้งแต่อายุยังน้อยจะขี้แย จุกจิก และมีปัญหาในการนอนหลับ เด็กในกลุ่มอายุนี้มักมีความอยากอาหารไม่ดีและน้ำหนักตัวลดลง

เด็ก อายุก่อนวัยเรียนพวกเขารู้สึกตึงเครียดเมื่อเล่นเกม พวกเขามีอาการเหงื่อออก และบางครั้งอาจมีอาการไม่สบายและปวดท้อง

ความสำเร็จของเด็กนักเรียนลดลง ความจำและความเคารพลดลง เด็กอาจมีอาการเหนื่อยล้า ปวดศีรษะบ่อย และบางครั้งก็มีอาการปวดตามข้อและข้อต่างๆ

อาการของพิษสะท้อนถึงความบกพร่องในการทำงานของระบบประสาท, การไหลเข้าของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคเข้าสู่ระบบประสาทโดยการไหลเข้าของสารพิษ

การเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิในช่วงวัณโรคในเด็กมีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ ส่วนใหญ่เธอเป็นไข้ย่อย ในเวลาเดียวกัน วัณโรคที่ใช้งานอาจเกิดขึ้นได้ที่อุณหภูมิปกติหรือมีไข้ บางครั้งอาจมีการระบุอุณหภูมิเปลี่ยนแปลงในเวลาเช้าและเย็น

อาการไอจะปรากฏขึ้นพร้อมกับวัณโรคขั้นสูงในเด็ก ในช่วงเริ่มต้นของการเจ็บป่วย อาการไอไม่ใช่อาการที่พบบ่อย

หลีกเลี่ยงอาการทางคลินิกที่ชัดเจนของการเจ็บป่วยในผู้ป่วยที่มีรูปแบบขั้นสูงและระยะลุกลามของวัณโรค ไม่มีอาการทางคลินิกที่ทำให้เกิดโรคของวัณโรค ดังนั้น การวินิจฉัยกระบวนการวัณโรคจึงทำได้เฉพาะกับการประเมินที่ครอบคลุมของข้อมูลการวินิจฉัย ข้อมูลการเฝ้าระวังตามวัตถุประสงค์ การวินิจฉัยวัณโรค วิธีการเฝ้าระวังด้วยเครื่องมือและในห้องปฏิบัติการ

โอการควิ้ลท์ฟลูออโรกราฟิกเชิงป้องกัน

การตรวจทางการแพทย์ด้วยฟลูออโรกราฟิกเชิงป้องกันจะดำเนินการสำหรับเด็กอายุ 15 และ 17 ปี หากไม่มีข้อมูลเกี่ยวกับการตรวจสอบเชิงป้องกันในกรณีเหล่านี้ กระบวนการฟลูออโรกราฟิกจะดำเนินการทีละขั้นตอน

ทันทีที่พบการเปลี่ยนแปลงบนฟลูออโรแกรม ผู้ป่วยจะได้รับการแต่งกายโดยจักษุแพทย์ทันที ซึ่งจำเป็นต้องมีการวินิจฉัยขั้นต่ำ (ODM)

ลักษณะเฉพาะของการรอดชีวิตจากวัณโรคในเด็กปฐมวัย

ถูกกำหนดโดยปฏิกิริยาและความสามารถในการรองรับของร่างกายเด็กตลอดจนลักษณะทางกายวิภาคและสรีรวิทยา

กลไกการต้านทานตามธรรมชาติ ทารกแรกเกิดอยู่ในภาวะบกพร่องทางสรีรวิทยา คู่บ่าวสาวมี:

- กิจกรรม phagocytic ต่ำของเม็ดเลือดขาว;

กิจกรรมการย้ายถิ่นต่ำของเซลล์โมโนนิวเคลียร์และเม็ดเลือดขาว เหตุผลก็คือการผลิตปัจจัยทางเคมีในเลือดลดลงและการผลิตปัจจัยยับยั้งที่เพิ่มขึ้นโดยเซลล์เม็ดเลือดขาวในเลือด ปัจจัยเหล่านี้เกี่ยวข้องกับการพัฒนาที่อ่อนแอของผิวหนังของทารกแรกเกิดก่อนที่จะเกิดปฏิกิริยาการอักเสบ

- ระยะสุดท้ายของ phagocytosis นั้นแสดงออกมาได้ดี ระยะย่อยอาหารแตกต่างจากระยะการดูดซึมอย่างมีนัยสำคัญ

- การขาดปัจจัยทางร่างกายของการต่อต้านตามธรรมชาติ ปัจจัยทางร่างกายของการดื้อยาตามธรรมชาติ (ส่วนประกอบ ไลโซไซม์ โพรเพอร์ดิน ฯลฯ) ทำให้เชื้อมัยโคแบคทีเรียถูกทำลายหลังการรักษาทางคลินิก การขาดส่วนประกอบหลักของส่วนประกอบเสริม (C3 และ C5) ส่งผลให้เกิดการสร้างสารเคมีในเลือดไม่เพียงพอและมีฤทธิ์ฆ่าเชื้อแบคทีเรียไม่เพียงพอ ไลโซไซม์มีอำนาจในการสลายแบคทีเรีย ระดับในเลือดของทารกแรกเกิดจะลดลงในผู้ใหญ่ และหลังจาก 7 วันก็ลดลงสู่ระดับเดียวกันในเลือดของมารดา กิจกรรมฆ่าเชื้อแบคทีเรียของproperdinเกิดขึ้นเฉพาะเมื่อใช้ร่วมกับส่วนประกอบเสริมและแมกนีเซียมไอออนเท่านั้น

ปัจจัยทางเคมีที่ไม่เฉพาะเจาะจงมีบทบาททางเคมีหลักจนกว่ากลไกภูมิคุ้มกันจำเพาะจะเจริญเต็มที่

การพัฒนาปฏิกิริยาทางภูมิคุ้มกัน ร่างกายของเด็กต้องเผชิญกับเงื่อนไขที่แตกต่างกัน:

- การทำงานของระบบ T- และ B- lymphocyte ยังไม่บรรลุนิติภาวะ การทำงานของ T-lymphocytes เริ่มต้นในทารกในครรภ์จนถึงอายุ 9-15 ปี แต่ปฏิกิริยาของภูมิไวเกินชนิดที่เพิ่มขึ้นจะถึงการพัฒนาเต็มที่จนกระทั่งสิ้นสุดระยะแรกของชีวิต ดังนั้น T-lymphocytes ของทารกในครรภ์และทารกแรกเกิดจึงยังไม่เจริญเต็มที่ตามหน้าที่ จำนวน B-lymphocytes ในทารกแรกเกิดใกล้เคียงกับค่าในผู้ใหญ่ แต่การผลิตแอนติบอดีมีน้อยหรือทุกวัน การทำงานของ B lymphocytes เริ่มต้นและได้รับการพัฒนาต่อไปในช่วงหลังคลอด ในกรณีของการติดเชื้อในมดลูกทำให้เกิดไอจีเอ็ม คลิตินของทารกในครรภ์ เลือดของทารกแรกเกิดมีเลือดในวันที่ไอจีเอ ปริมาณนี้จะเพิ่มขึ้นจนกระทั่งสิ้นสุดระยะแรกของชีวิตและถึงระดับผู้ใหญ่จนถึงอายุ 8-15 ปีไอจีจี ในเด็กแรกเกิด - มารดาและในช่วง 6 เดือนแรกของชีวิตเด็กจะมีแคแทบอลิซึมและระดับลดลงไอจีจี ปรากฏเฉพาะในปีที่ 6 ของชีวิตเด็กและจำนวนเพิ่มขึ้นเป็น 5-15 ปี ดังนั้นเด็กที่เกิดใหม่จึงเกิดโดยไม่มีประเภทร่างกายเฉพาะเจาะจงที่เต็มเปี่ยม

ในทารกแรกเกิดมีความบกพร่องในการทำงานของระบบ T- และ B ของเซลล์เม็ดเลือดขาวทำให้ความต้านทานที่ไม่จำเพาะลดลง ปัจจัยเหล่านี้มีบทบาทในการสร้างกลไกภูมิคุ้มกันต่อต้านวัณโรค ในทางกลับกัน การติดเชื้อวัณโรคเกิดขึ้นเมื่อเจ็บป่วย การทำงานของระบบภูมิคุ้มกันก็เปลี่ยนแปลงไป

ในทารกที่คลอดก่อนกำหนด มีปัจจัยการต้านทานตามธรรมชาติบกพร่องอย่างมีนัยสำคัญ ภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องในทารกคลอดก่อนกำหนดจะรุนแรงและคงอยู่จนถึงวันเกิดปีที่ 5

การแพร่เชื้อวัณโรคอันไม่พึงประสงค์นั้นสัมพันธ์กับลักษณะเฉพาะของอวัยวะระบบทางเดินหายใจในเด็กวัยต้นการพัฒนา ชีววิทยากายวิภาคและสรีรวิทยา:

- ความบางอย่างเห็นได้ชัด ขนาดที่เล็ก และการขาดความแตกต่างในการทำงานของระบบนำอากาศ ทำให้การระบายอากาศของปอดเพิ่มขึ้น และยับยั้งการตกตะกอนของจุลินทรีย์

- คุณสมบัติของระบบน้ำเหลือง

- จำนวนต่อมเมือกไม่เพียงพอในเยื่อเมือกของหลอดลมซึ่งทำให้ของเหลวแห้งและอำนวยความสะดวกในการอพยพของสารของบุคคลที่สามรวมถึงจุลินทรีย์

- acini มีโครงสร้างดั้งเดิมที่อุดมไปด้วยเส้นใยยืดหยุ่น ซึ่งช่วยลดการไหลของลมและช่วยให้จุลินทรีย์เกาะตัวได้ดี

- ปริมาณสารลดแรงตึงผิวที่ไม่เพียงพอจะช่วยป้องกันการพัฒนาของการเปลี่ยนแปลงการอักเสบที่ขาเฉพาะและไม่เฉพาะเจาะจงและส่งเสริมการพัฒนาของ atelectasis

การสืบทอดคุณสมบัติเหล่านี้ในเด็กปฐมวัยคือการลดลงอย่างมากในเนื้อเยื่อน้ำเหลือง, แนวโน้มที่จะมีลักษณะทั่วไปของกระบวนการวัณโรค, แนวโน้มที่จะเกิดเนื้อร้ายในอวัยวะต่างๆ

ลักษณะเฉพาะของการเอาชนะวัณโรคในช่วงก่อนมีขน ถูกกำหนด:

- กิจกรรมที่เพิ่มขึ้นของกระบวนการเผาผลาญซึ่งนำไปสู่ภาพที่ชัดเจนของความก้าวหน้าทางสัณฐานวิทยาและทางคลินิกของกระบวนการวัณโรค

- ความไม่สม่ำเสมอของการเจริญเติบโตของอวัยวะและระบบอื่น ๆ ซึ่งอาจบ่งบอกถึงการเลือกตำแหน่งของโรค

- การพัฒนาอย่างรวดเร็วของระบบประสาทต่อมไร้ท่อ: การทำงานของต่อมไทรอยด์และต่อมไทรอยด์มีความเข้มแข็งในเด็กย่อย, ความสัมพันธ์ระหว่างกระบวนการตื่นตัวและการชุบสังกะสีใน ระบบประสาท(เคารพกระบวนการตื่นรู้)

ปัจจัยเหล่านี้ถูกกำหนดโดยความสามารถในการปรับตัวของภูมิคุ้มกันของร่างกาย ธรรมชาติของการเอาชนะภูมิคุ้มกัน ปฏิกิริยาการอักเสบ และการงอกใหม่ และด้วยเหตุนี้ โดยอาการทางคลินิกและผลของการเจ็บป่วย

ในผู้ป่วยวัณโรค การเปลี่ยนแปลงของการตรวจเลือดไม่ทำให้เกิดโรค ในรูปแบบวัณโรคที่ จำกัด และออกฤทธิ์ต่ำจะมีลักษณะภาวะ hypochromia ของเม็ดเลือดแดงที่มีปริมาตรปกติ ด้วยการแทรกซึมขนาดใหญ่หรือโรคปอดบวมแบบ caseous, มีต่อมน้ำเหลืองอักเสบแบบ caseous, การระคายเคืองในลำไส้โดยเฉพาะ, เช่นเดียวกับการมีเลือดออกในปอดหรือหลังผ่าตัดขนาดใหญ่, เม็ดเลือดแดงและ microcytosis, oligochromasia, polychromasia จะถูกระบุ Iyu Macrocytosis และโดยเฉพาะอย่างยิ่ง poikilocytosis เกิดขึ้นเร็วมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อมีภาวะโลหิตจางเกิดขึ้น จำนวนเรติคูโลไซต์ในระยะที่ได้รับการชดเชยของวัณโรคอยู่ระหว่าง 0.1 ถึง 0.6% ในระยะการชดเชยย่อยจะมีค่าตั้งแต่ 0.6 ถึง 1.0% และในระยะที่ไม่มีการชดเชยจะเป็น 1% ของเรติคูโลไซต์

ด้วยวัณโรคในบางกรณีอาจมีเม็ดเลือดขาวตาย (มากถึง 15,000 เม็ดเลือดขาว) หรือแม้กระทั่งเม็ดเลือดขาวซึ่งเกิดขึ้นใน 2-7% ของกรณีในผู้ป่วยที่มีรูปแบบกระบวนการที่เชื่อมต่อถึงกันและดำเนินการได้ง่ายและใน 12 .5% - ด้วยวัณโรคที่ทำลายและก้าวหน้าของขา

ปัญหาที่พบบ่อยที่สุดเกิดขึ้นในสูตรเม็ดเลือดขาว หมายถึงนิวโทรฟิโลซีสทั้งบางส่วนและแบบสัมบูรณ์ การตายของเม็ดเลือดขาวนับทางด้านซ้ายของโพรไมอีโลไซต์ เซลล์เม็ดเลือดขาวไม่ค่อยแออัดในกรณีของวัณโรคที่ไม่ซับซ้อน การเพิ่มขึ้นของจำนวนนิวโทรฟิลที่มีรายละเอียดทางพยาธิวิทยาใน hemogram ของผู้ป่วยวัณโรคมักจะบ่งบอกถึงความล้มเหลวของกระบวนการเสมอ: ในคนไข้ที่เป็นวัณโรครุนแรงนิวโทรฟิลทั้งหมดอาจมีรายละเอียดทางพยาธิวิทยา เมื่อวัณโรคทุเลาลง การทำงานของนิวเคลียสจะกลับมาเป็นปกติในไม่ช้า รายละเอียดทางพยาธิวิทยาของนิวโทรฟิลจะถูกเก็บรักษาไว้นานกว่าการเปลี่ยนแปลงอื่น ๆ ของการตกเลือด

วัณโรคปฐมภูมิส่วนใหญ่มักเกิดร่วมกับภาวะต่อมน้ำเหลือง ซึ่งบางครั้งเกิดขึ้นภายในหลายปีหลังจากเกิดแผลเป็นจากการเปลี่ยนแปลงบางอย่าง วัณโรคระยะทุติยภูมิในระยะเฉียบพลันเนื่องจากความรุนแรงของกระบวนการสามารถมาพร้อมกับลิมโฟไซต์หรือลิมโฟพีเนียจำนวนปกติ

ในการทดสอบเพื่อประเมินกระบวนการวัณโรคสถานที่พิเศษนั้นถูกครอบครองโดยค่าของการไหลของตะกอนของเม็ดเลือดแดง (ESV) ซึ่งมีความสำคัญในการประเมินความคืบหน้าของกระบวนการวัณโรคและการระบุรูปแบบที่ใช้งานอยู่ การเพิ่มขึ้นของ SOE บ่งบอกถึงการมีอยู่ของกระบวนการทางพยาธิวิทยา (การติดเชื้อ - การอักเสบ, เป็นหนอง, บำบัดน้ำเสีย, เม็ดเลือดแดงแตก, ต่อมน้ำเหลือง ฯลฯ ) และเป็นตัวบ่งชี้ความรุนแรงอย่างไรก็ตามตัวบ่งชี้ปกติของ SOE ยังไม่สายเกินไปที่จะระบุ ประเภทของพยาธิวิทยา . การตกตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่เร่งขึ้นนั้นมาพร้อมกับการเพิ่มขึ้นของโกลบูลินในเลือด, ไฟบริโนเจน, คอเลสเตอรอลและการเปลี่ยนแปลงของความหนืดของเลือด การตกตะกอนของเม็ดเลือดแดงที่เพิ่มขึ้นเป็นเรื่องปกติสำหรับเงื่อนไขที่มาพร้อมกับความเข้มข้นของเม็ดเลือดแดงซึ่งเพิ่มขึ้นด้วยอัลบูมินและกรดเบส

การตรวจเลือดในผู้ป่วยวัณโรคจะเปลี่ยนแปลงไปในระหว่างกระบวนการรักษา ความผิดปกติทางโลหิตวิทยาเป็นที่ทราบกันเร็วกว่าการรักษาที่ประสบความสำเร็จมากกว่า ขณะเดียวกัน ผู้เป็นแม่ก็ฉีดยาต้านแบคทีเรียหลายชนิดเข้าไปในเม็ดเลือดทันที พวกเขามักจะบ่งบอกถึง eosinophilia ในบางกรณี - เม็ดเลือดขาวและบ่อยครั้งมากขึ้นเม็ดเลือดขาวแม้กระทั่งการเกิด agranulocytosis และปฏิกิริยาต่อมน้ำเหลือง - ไขว้กันเหมือนแห การติดตามทางโลหิตวิทยาอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์ข้อมูลที่ดึงออกมาอย่างถูกต้องมีความสำคัญอย่างยิ่งในการประเมินสถานะทางคลินิกของผู้ป่วย พลวัตของกระบวนการ และประสิทธิผลของการรักษาที่ซบเซา

การวิเคราะห์ทางคลินิกของส่วน

ในกรณีของวัณโรคของระบบเยื่อเมือกการตรวจน้ำมูกเป็นวิธีการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการหลัก คุณสามารถระวังเม็ดเลือดขาว, เม็ดเลือดแดง, โปรตีนในปัสสาวะ, ภาวะ hypoisosthenuria, เชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรค, แบคทีเรียที่ไม่จำเพาะเจาะจง

เม็ดเลือดขาวเป็นอาการที่พบบ่อยที่สุดของวัณโรคของระบบต่อมไทรอยด์ก่อนการรักษาด้วยเคมีบำบัดโดยเฉพาะและการรักษาเส้นเลือดขอดทุกวันเช่นโดยมีการทำลายรูของท่อใหม่ การทดสอบของ Nechiporenko (จำนวนเม็ดเลือดขาวในส่วน 1 มิลลิลิตร) ช่วยในการประเมินระยะของเม็ดเลือดขาวในโรคไตวัณโรคอย่างเป็นกลางมากขึ้น และในหลายกรณี ให้ตรวจพบในระหว่างการวิเคราะห์เบื้องต้นตามปกติของส่วนนั้น อย่างไรก็ตามจำเป็นต้องรู้ว่าเม็ดเลือดขาวสามารถเกิดขึ้นได้ใน pyelonephritis เฉียบพลันและเรื้อรัง, โรคกระเพาะปัสสาวะอักเสบ, ท่อปัสสาวะอักเสบ, นิ่วในกระเพาะปัสสาวะและท่อ

เม็ดเลือดแดง เช่นเดียวกับเม็ดเลือดขาว เคารพหนึ่งในสัญญาณทางห้องปฏิบัติการที่พบบ่อยที่สุดของวัณโรค ระบบแยกส่วน. ความถี่ของภาวะปัสสาวะเป็นเลือดขึ้นอยู่กับขอบเขตของกระบวนการ และการพัฒนากระบวนการทำลายวัณโรคก็กำลังเพิ่มขึ้นทั่วโลก เม็ดเลือดแดงที่ไม่มีเม็ดเลือดขาวเป็นเรื่องปกติมากขึ้นในระยะแรกของวัณโรคเกรดต่ำ ภาวะปัสสาวะเป็นเลือดซึ่งมีความสำคัญมากกว่าเม็ดเลือดขาวเป็นข้อโต้แย้งที่สำคัญต่อวัณโรคโดยมีความแตกต่างจากภาวะไตอักเสบที่ไม่จำเพาะเจาะจง

การวิเคราะห์เลือดทางชีวเคมี

ในกรณีของวัณโรค การเปลี่ยนแปลงของตัวชี้วัดทางชีวเคมีบางอย่างจะเกิดขึ้นก่อนในทุกขั้นตอนของกระบวนการ การเสื่อมสภาพ และการเจ็บป่วยที่เกิดขึ้นร่วมกัน ในผู้ป่วยที่เป็นวัณโรคปอดและอวัยวะอื่น ๆ ที่ไม่ได้ใช้งาน โปรตีนในซีรั่มและเศษส่วนโปรตีนของซีรั่มในเลือดจะไม่เปลี่ยนแปลงและบ่งบอกถึงการลดลงตามปกติ

ในรูปแบบเฉียบพลันของวัณโรคเช่นเดียวกับในรูปแบบเฉียบพลันและเรื้อรังของวัณโรคค่าสัมประสิทธิ์อัลบูมิน - โกลบูลินจะเปลี่ยนไป

ความสำคัญโดยรวมในการประเมินสถานะการทำงานและการเสื่อมสภาพทางอินทรีย์ของตับในวัณโรคและภาวะแทรกซ้อนอาจมีนัยสำคัญในเลือดของน้ำเหลืองของน้ำดีโดยตรงและถุงน้ำดี, แอสพาเทตอะมิโนทรานสเฟอเรส (AST), อะลานีนอิโนทรานสเฟอเรส (ALT) ช่วงของอะมิโนทรานสเฟอเรสที่กำหนดแบบไดนามิก bilerubin ในการรักษาผู้ป่วยวัณโรคโดยเฉพาะอย่างยิ่งในรูปแบบที่สำคัญเป็นองค์ประกอบบังคับของการรักษาทางชีวเคมีของผู้ป่วยวัณโรคและดำเนินการตามผลลัพธ์

การประเมินสถานะการทำงานของผู้ป่วยรวมถึงการวัดค่าครีเอตินีนในเลือดและอัตราการกรองไตโดยใช้สูตร Cockcroft-Gault Rozrahunok ShKF พร้อมการทดสอบ vikoristanny Rehberg ให้ผลลัพธ์ที่แม่นยำน้อยกว่า

เป้าหมายหลักของการตรวจสอบทางชีวเคมีแบบไดนามิกของผู้ป่วยวัณโรคคือการติดตามความคืบหน้าของกระบวนการ การตรวจหาผลข้างเคียงตั้งแต่เนิ่นๆ และการแก้ไขการรบกวนต่อสภาวะสมดุลอย่างเพียงพอ

การสร้างวิธีการทางชีวเคมีในการสอบสวนวัณโรคภายหลังการเป็นอยู่

ตัวบ่งชี้ที่ให้ข้อมูลมากที่สุดคือการแทนที่กรดวัณโรคในสารประกอบทางชีวภาพซึ่งเกี่ยวข้องกับปัญหาทางเทคนิค (ความจำเป็นในการใช้โครมาโตกราฟีแบบก๊าซต่อเนื่องและแมสสเปกโตรมิเตอร์)

การศึกษาที่น่าสนใจเกี่ยวกับกิจกรรมของ adenosine deaminase คือเอนไซม์ที่มีอยู่ในพื้นที่ต่อไปนี้: ไขข้อ, เยื่อหุ้มหัวใจ, น้ำในช่องท้องหรือกระดูกสันหลัง ผู้ผลิตหลักของอะดีโนซีนดีอะมิเนสคือลิมโฟไซต์และโมโนไซต์ กิจกรรมที่สำคัญของ adenosine deaminase ในแหล่งทางชีวภาพช่วยในการวินิจฉัยวัณโรคไขข้ออักเสบ, วัณโรคของต่อมน้ำเหลือง, เยื่อหุ้มสมองอักเสบวัณโรค, วัณโรคซีโรอักเสบ

ตัวชี้วัดทางชีวเคมีบางอย่างเมื่อพิจารณาจากความจำเพาะของการกำหนดเป้าหมายนั้น จะถูกตรวจพบโดยเฉพาะในพื้นที่ทางชีววิทยาใกล้กับแหล่งกำเนิดมลพิษ จำนวนตัวชี้วัดลดลงในการบริหาร tuberculin ใต้ผิวหนังหรือภายใน (ก่อนการบริหารและ 48 และ 72 ปีหลังจากนั้น) หลังจากนั้น จะกำหนดระดับการเพิ่มขึ้นของระดับของเครื่องหมาย (เป็น%) ที่สัมพันธ์กับระดับเอาต์พุต

เป็นการดีที่สุดที่จะตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์ทรานซามิดิเนสเฉพาะอวัยวะซึ่งปรากฏในกรณีของโรคคุณภาพต่ำ การตรวจสอบทรานซามิดิเนสได้รับการยืนยันเฉพาะในบริบทของการบริหารวัณโรคใต้ผิวหนังโดยใช้วิธีการทำให้กระบวนการจุดระเบิดในพื้นที่รุนแรงขึ้นเท่านั้น กิจกรรมของทรานซามิดิเนสวัดในข้าวโพดและ 24-72 ปีหลังการให้ tuberculin 50 TI การหมักที่เพิ่มขึ้น 2 ครั้งขึ้นไปช่วยให้ 82% ของกรณีสามารถแยกแยะวัณโรคที่ใช้งานอยู่จาก pyelonephritis เรื้อรังเฉียบพลันได้

ในกรณีของวัณโรคในอวัยวะเพศหญิง ความเข้มข้นของ haptoglobin และ malondialdehyde ในเลือดจะถูกกำหนดโดยการทดสอบวัณโรคที่เร้าใจ แนะนำ tuberculin ทีละน้อยในขนาด 50 TI และทำการตรวจสอบทางชีวเคมีซ้ำหลังจาก 72 ปี ในกรณีของสาเหตุของวัณโรคระดับของการเพิ่มขึ้นของระดับ haptoglobin จะไม่น้อยกว่า 28% และระดับของ malondialdehyde - 39% หรือมากกว่า นอกจากนี้ยังมีกิจกรรมที่สำคัญของ adenosine deaminase ในบริเวณช่องท้องซึ่งไม่รวมอยู่ในพื้นที่ดักลาส จุดจะถูกตรวจสอบอีกครั้ง 72 ปีหลังจากการฉีด tuberculin ภายในในขนาด 0.1 TI และ 0.01 TI ลงในบริเวณที่ฉายอวัยวะภายในลงบนผนังด้านหน้าของลิ้นหัวใจ เพื่อประโยชน์ของกระบวนการวัณโรคจะมีการสังเกตการเพิ่มขึ้นของกิจกรรมของ adenosine deaminase 10% ขึ้นไปซึ่งเท่ากับผลลัพธ์

หากดวงตาได้รับผลกระทบ ให้สังเกตปฏิกิริยาโฟกัสที่เป็นผลมาจากการตอบสนองต่อการกระตุ้นแอนติเจน ในกรณีนี้ไม่น่าเป็นไปได้ที่จะพัฒนาประเภทที่แสดงออกอย่างชัดเจนซึ่งมาพร้อมกับฟังก์ชั่นการมองเห็นที่ลดลง เนื่องจากการประเมินปฏิกิริยาการอักเสบขั้นต่ำมักเป็นเรื่องยาก สำหรับการกำหนดเป้าหมายของโครงสร้างจึงแนะนำให้มุ่งเน้นควบคู่ไปกับระดับการเพิ่มขึ้นของระดับ haptoglobin หรือ adenosine deaminase ในซีรั่มในเลือด

การตรวจสอบทางชีวเคมีทั้งหมดดำเนินการร่วมกับวิธีการอื่นๆ

การตรวจระบบเลือดกล่องเสียง

ความเกี่ยวข้องของการศึกษาระบบเลือดกล่องเสียงในวิชากุมารเวชศาสตร์นั้นเกิดจากการมีภาวะไอเป็นเลือดหรือมีเลือดออกในปอดในผู้ป่วยวัณโรคจำนวนหนึ่งรวมถึงภาวะแทรกซ้อนของการแข็งตัวของเลือดในระหว่างการผ่าตัดรักษาและวัณโรค นอกจากนี้ เป็นเรื่องปกติที่วัณโรคจะดำเนินการในระยะแฝง การแข็งตัวของเลือดภายในมีส่วนช่วยในการป้องกันการเจ็บป่วยและประสิทธิผลของเคมีบำบัด

ในผู้ป่วยวัณโรคโรคที่เกิดจากส่วนประกอบของการอักเสบที่มากเกินไปจะช่วยป้องกันการลดลงของฤทธิ์ต้านการแข็งตัวของเลือด ในผู้ป่วยที่มีอาการอักเสบที่ขาเล็กน้อยและเนื่องจากความสำคัญขององค์ประกอบที่มีประสิทธิผลของการอักเสบการแข็งตัวของเลือดภายในจึงแสดงออกมาไม่มีนัยสำคัญ ผู้ป่วยวัณโรคจะมีอาการไอเป็นเลือดและ เลือดออกของเลเจนสถานะของระบบเลือดกล่องเสียงในรูปแบบต่างๆ: ในผู้ป่วยที่มีการสูญเสียเลือดต่ำที่ความสูงของเม็ดเลือดแดงหรือทันทีหลังจากการใช้การไหลเวียนของเลือดกล่องเสียงเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วเนื่องจากระดับของความเข้มข้นที่เด่นชัดจะได้รับการปกป้องจากกระบวนการ th ของ thrombin การก่อตัวด้วยกล่องเสียงอักเสบ "โครงสร้าง" ขั้นสูงที่เก็บรักษาไว้ ในคนไข้ที่เสียเลือดมาก ความเข้มข้นของไฟบริโนเจนจะลดลง กิจกรรมของปัจจัย XIII ปริมาณเกล็ดเลือด ในขั้นตอนของการผ่าตัดรักษาในผู้ป่วยที่มีวัณโรคในรูปแบบที่เกี่ยวข้องไม่มีการรบกวนระบบสภาวะสมดุลอย่างมีนัยสำคัญ ในผู้ป่วยที่มีกระบวนการกว้างขวางเนื่องจากโรคปอดบวมหรือการผ่าตัดเยื่อหุ้มปอดอักเสบร่วมกันมักเกิดกลุ่มอาการการแข็งตัวของหลอดเลือดในหลอดเลือดที่แพร่กระจายซึ่งสามารถพัฒนาเป็นรูปแบบของ "ความเจ็บป่วยอื่น ๆ "

ในการติดตามอัตราของระบบเลือดคอหอยในผู้ป่วยวัณโรคปอดจำเป็นต้องวัดชั่วโมงที่มีเลือดออกและชั่วโมงเลือดคอหอยที่ใช้งานอยู่ (APTH), ไฟบริโนเจน, ชั่วโมงทรอมบิน, ดัชนีโปรทรอมบิน .

การวิจัยฮอร์โมน

การสังเกตการทดลองและทางคลินิกในปัจจุบันบ่งชี้ว่ามีการเปลี่ยนแปลงสถานะของฮอร์โมนในการอักเสบของวัณโรคโดยเฉพาะ ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าการแก้ไขความผิดปกติของต่อมใต้สมอง - suprathyroid, ระบบต่อมใต้สมอง - ต่อมไทรอยด์และการทำงานของต่อมใต้สายเสียงร่วมกับการรักษาด้วยยาต้านวัณโรคมีความเกี่ยวข้องกับการกระตุ้นกระบวนการสร้างพังผืดและการซ่อมแซมในช่วงกลางของการเผาไหม้ที่เฉพาะเจาะจง

สถานะการทำงานของระบบต่อมใต้สมอง-ต่อมไทรอยด์สามารถตัดสินได้โดยการใช้ระดับไตรไอโอโดไทโรนีนในเลือด (T 3), ไทรอกซีน (T 4) และฮอร์โมนกระตุ้นต่อมไทรอยด์ในต่อมใต้สมอง (TSH) พบว่าผู้ป่วยวัณโรคปอดตรวจพบภาวะพร่องแบบไม่แสดงอาการในผู้ป่วยวัณโรคปอดได้ 38-45% และมักได้รับการวินิจฉัยว่าอยู่ในกระบวนการที่มีการแพร่กระจายและเป็นโพรงเส้นใย ในรูปแบบเหล่านี้ระดับของทั้ง T3 และ T4 จะลดลงอย่างรวดเร็วที่สุด และความไม่สมดุลของฮอร์โมนเหล่านี้เกิดขึ้นในรูปแบบของอัตราส่วนที่เพิ่มขึ้นของ T4 / T3

ประเมินการทำงานของโรคหัดของต่อมซูปราเกลนอยด์เทียบกับระดับคอร์ติซอลในซีรั่มในเลือด และประเมินการทำงานของต่อมใต้สายเสียงโดยความเข้มข้นของอินซูลินที่ทำปฏิกิริยากับภูมิคุ้มกัน ในช่วงระยะเฉียบพลันของการเจ็บป่วยจากการติดเชื้อ ความต้องการคอร์ติซอลและอินซูลินภายนอกจะเพิ่มขึ้น ภาวะอินซูลินในเลือดสูงยังหมายถึงความต้านทานต่ออินซูลินของเนื้อเยื่อในร่างกายซึ่งเป็นเรื่องปกติสำหรับกระบวนการจุดระเบิดที่ใช้งานอยู่ซึ่งเป็นปฏิกิริยาเฉพาะ ความสำคัญของการทำงานของกลูโคคอร์ติคอยด์ของต่อมเหนือประสาทในระหว่างวัณโรคที่ขาทำให้สามารถตรวจพบภาวะไฮเปอร์คอร์ติคในผู้ป่วยส่วนใหญ่ได้ ตัวชี้วัดปกติของความเข้มข้นของคอร์ติซอลในเลือดในผู้ป่วยที่มีอาการอักเสบติดเชื้อในช่วงเวลาเฉียบพลันสามารถประเมินได้ว่าเป็นการขาดการทำงานของกลูโคคอร์ติคอยด์ที่ชัดเจนของโรคหัดของต่อมเหนือประสาทซึ่งอาจทำหน้าที่ยืนก่อนการบำบัดทดแทนด้วยปริมาณกลูโคคอร์ติคอยด์ที่เพียงพอ

ประมาณหนึ่งในสามของผู้ป่วยวัณโรคสามารถระบุได้ว่าระดับอินซูลินต่ำและเข้าใกล้ขีดจำกัดล่างของบรรทัดฐานในขณะที่ 13-20% มีภาวะอินซูลินในเลือดสูงอย่างมีนัยสำคัญ ทั้งความดันเลือดต่ำและภาวะอินซูลินในเลือดสูงเป็นปัจจัยเสี่ยงสูงต่อการพัฒนาความผิดปกติของการเผาผลาญคาร์โบไฮเดรตในระดับความรุนแรงที่แตกต่างกัน การเปลี่ยนแปลงในกิจกรรมการทำงานของ B-clin ในต่อมใต้สายเสียงจำเป็นต้องมีการตรวจสอบระดับน้ำตาลในเลือดเป็นประจำในผู้ป่วยวัณโรคและการป้องกันของตัวเอง โรคเบาหวานทางวัฒนธรรม. ก่อนหน้านั้น. สิ่งนี้ทำหน้าที่เป็นการปรับสภาพเพิ่มเติมเพื่อความสมบูรณ์ของการส่งมอบอินซูลินในปริมาณทางสรีรวิทยา การบำบัดที่ซับซ้อนวัณโรค.

โดยทั่วไป การลดลงของระดับฮอร์โมนไทรอยด์ ความไม่สมดุล ภาวะคอร์ติโซเลเมียในเลือดสูง และภาวะอินซูลินในเลือดสูง จะพบได้บ่อยที่สุดในผู้ป่วยที่มี ชัยชนะครั้งสำคัญกระบวนการวัณโรคที่มีการติดเชื้อในระดับสูงและมีอาการพิษจากวัณโรคอย่างรุนแรง

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการของวัณโรค

การตรวจสอบทางจุลชีววิทยาเป็นสิ่งจำเป็นในการระบุกรณีวัณโรค ตรวจสอบการวินิจฉัย ติดตามและแก้ไขเคมีบำบัด ประเมินผลการรักษา หรืออีกนัยหนึ่งคือ ตั้งแต่ช่วงเวลาของการทดสอบซ้ำผู้ป่วยวัณโรคจนกว่าจะหายดี

โปรแกรมและโครงการด้านระบาดวิทยาทั้งหมดขึ้นอยู่กับการประเมินจำนวนชนิดของแบคทีเรีย ซึ่งไม่สามารถพัฒนาได้หากปราศจากการใช้วิธีการทางห้องปฏิบัติการในการตรวจหาเชื้อวัณโรค ด้วยการเฝ้าระวังสิ่งที่เรียกว่าประชากรที่ไม่มีการรวบรวมกัน แบคทีเรียหลายร้อยสายพันธุ์มีจำนวนถึง 70 สายพันธุ์หรือมากกว่านั้น ซึ่งต้องใช้วิธีการทางห้องปฏิบัติการในการเข้าถึง อย่างมีประสิทธิภาพการตรวจหาผู้ป่วยวัณโรคในกลุ่มประชากรกลุ่มนี้

วิธีทางจุลชีววิทยาแบบดั้งเดิมในการวินิจฉัยวัณโรค - การตรวจทางแบคทีเรียและวัฒนธรรม วิธีการปัจจุบัน ได้แก่ การเพาะเลี้ยงเชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรคในระบบอัตโนมัติและการตั้งค่า PLR อย่างไรก็ตาม วิธีการทั้งหมดนี้ผสมผสานอย่างใกล้ชิดกับวิธีการทางแบคทีเรียวิทยาแบบคลาสสิก

การรวบรวมวัสดุการวินิจฉัย

ประสิทธิผลของการวิจัยในห้องปฏิบัติการในโลกส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับวัสดุที่ใช้ในการวินิจฉัย การปฏิบัติตามกฎเกณฑ์ในการรวบรวม บันทึก และขนส่งวัสดุวินิจฉัย ตลอดจนการปฏิบัติตามขั้นตอนวิธีในการรักษาผู้ป่วยอย่างแม่นยำจะส่งผลอย่างมากต่อผลลัพธ์และมั่นใจในความปลอดภัยทางชีวภาพ

หากต้องการตรวจหาวัณโรค ให้ใช้วัสดุหลากหลายชนิด เนื่องจากความจริงที่ว่าวัณโรคปอดเป็นรูปแบบที่แพร่หลายที่สุดของการติดเชื้อวัณโรควัสดุหลักในการตรวจสอบคือเสมหะและมุมมองประเภทอื่น ๆ ของต้นไม้หลอดลม: มุมมองของทางเดินหายใจส่วนบน, การกำจัดหลังจากการสูดดมละออง: น้ำล้างหลอดลม; หลอดลม zmivi; วัสดุที่ได้รับระหว่างการตรวจหลอดลม, การตรวจชิ้นเนื้อในช่องท้องและในปอด: หลอดลมดูด, รอยเปื้อนกล่องเสียง, สารหลั่ง, รอยเปื้อนจากบาดแผล ฯลฯ

ประสิทธิผลของการติดตามจะเพิ่มขึ้นเมื่อมีการดำเนินการควบคุมเพื่อรวบรวมวัสดุที่เป็นโรค เพื่อจุดประสงค์นี้ คุณต้องมีห้องที่มีอุปกรณ์พิเศษหรือซื้อห้องโดยสารพิเศษ การรวบรวมวัสดุไม่ใช่ขั้นตอนที่ปลอดภัย ดังนั้นจึงจำเป็นต้องรวบรวมวัสดุเพื่อการตรวจสอบโดยต้องปฏิบัติตามกฎการควบคุมการติดเชื้อ

วัสดุสำหรับการทดสอบเชื้อ Mycobacterium tuberculosis จะถูกรวบรวมในขวดปลอดเชื้อที่มีฝาปิดที่แข็งแรงเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของตัวกลางและปกป้องวัสดุที่เก็บรวบรวมจากการปนเปื้อน

ขวดสำหรับรวบรวมวัสดุวินิจฉัยมีความรับผิดชอบต่ออันตรายดังต่อไปนี้:

• ไวน์ทำจากวัสดุที่ทนต่อแรงกระแทก
• ไวน์ละลายได้ง่ายเมื่อนึ่งฆ่าเชื้อ
• ปริมาณที่เพียงพอ (40-50 มล.):
• ช่องเปิดกว้างสำหรับเก็บเมือก (เส้นผ่านศูนย์กลางไม่น้อยกว่า 30 มม.)
• ควรระมัดระวังสายตาที่ชัดเจนหรือสายตาแหลมคมเพื่อประเมินความแข็งแรงและความนุ่มนวลของตัวอย่างที่เก็บมาโดยไม่ต้องเปิดฝา

เพื่อให้ได้ผลลัพธ์การวิจัยที่ดีที่สุด จำเป็นต้องมีส่วนร่วมกับจิตใจต่อไปนี้:

• การรวบรวมวัสดุจะดำเนินการก่อนที่จะเริ่มทำเคมีบำบัด
• ต้องรวบรวมวัสดุสำหรับการตรวจสอบก่อนรับประทานอาหารและยาจากบาดแผล
• เพื่อสอบสวนต่อไปจำเป็นต้องเก็บตัวอย่างเสมหะจากบาดแผลอย่างน้อย 3 ตัวอย่าง เก็บเสมหะเป็นเวลา 3 วันหลังการนอนหลับ
• วัสดุที่รวบรวมจะต้องถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการอย่างรวดเร็ว:
• ในช่วงเวลาที่การส่งมอบวัสดุไปยังห้องปฏิบัติการเป็นเรื่องยากมากควรเก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 ° C ไม่เกิน 48 ปี
• เมื่อขนย้ายวัสดุจำเป็นต้องใช้ความระมัดระวังเป็นพิเศษเพื่อให้มั่นใจในความสมบูรณ์ของขวด

เสมหะที่เก็บรวบรวมอย่างเหมาะสมอาจเป็นเมือกหรือมีหนองในธรรมชาติ ปริมาณที่เหมาะสมที่สุดสำหรับเสมหะส่วนที่เหลือคือ 3-5 มล.

เสมหะจะถูกรวบรวมภายใต้การดูแลของแพทย์ ผู้รับผิดชอบในการเก็บเสมหะต้องปฏิบัติตามกฎต่อไปนี้:

• จำเป็นต้องอธิบายให้ผู้ป่วยฟังถึงการติดตามผลและความจำเป็นต้องไอ ไม่ใช่เสมหะหรือมูกโพรงจมูก แต่แทนที่จะไอลึกๆ สิ่งนี้เกิดขึ้นได้จากการไอที่มีประสิทธิผลซึ่งเกิดขึ้นหลังจากหายใจเข้าลึกๆ หลาย (2-3) ครั้ง ก่อนที่ผู้ป่วยจะต้องล้างปากด้วยน้ำต้มเพื่อกำจัดส่วนหลักของจุลินทรีย์ที่อยู่ในปากและของเหลวส่วนเกินซึ่งทำให้ยากต่อการตรวจจับเสมหะ
• หากคุณมีส่วนร่วมในการเก็บเสมหะ ผู้ประกอบวิชาชีพทางการแพทย์นอกเหนือจากเสื้อคลุมและหมวกแก๊ปแล้ว จะต้องสวมหน้ากากอนามัย ถุงมือยาง และผ้ากันเปื้อนสำหรับปิดเหงือก
• ยืนอยู่ด้านหลังผู้ป่วยแนะนำให้ถือขวดยามอกไว้ใกล้ริมฝีปากแล้วเทเสมหะใด ๆ ในโลกทันทีแล้วไอให้ในกรณีนี้จำเป็นต้องถ่ายโอนเพื่อให้กระแสไหลย้อนกลับโดยตรงไปยัง แพทย์อิฟนิกา:
• เมื่อเก็บเสมหะเสร็จแล้ว ผู้ประกอบวิชาชีพแพทย์จะต้องปิดฝาขวดด้วยความระมัดระวัง และประเมินความสม่ำเสมอและความเป็นกรดของเสมหะที่เก็บมา จากนั้นขวดจะถูกติดฉลากและวางไว้ในภาชนะพิเศษสำหรับขนส่งไปยังห้องปฏิบัติการ

หากผู้ป่วยไม่เห็นเสมหะในคืนก่อนและเช้าตรู่ของวันที่รวบรวมวัสดุจำเป็นต้องให้เสมหะแก่เขา: สารสกัดจากรากมาร์ชเมลโลว์ (มูคาลติน), บรอมเฮกซีน, แอมโบรโซล ฯลฯ - หรือหยุดการสูดดมแบบแห้ง vikorista และครอบครองซึ่งติดตั้งไว้ในห้องเพื่อรวบรวมเสมหะ วัสดุที่รวบรวมในลักษณะนี้ไม่สนับสนุนการอนุรักษ์และอยู่ภายใต้การตรวจสอบในวันที่รวบรวม เพื่อให้ "การสั่นสะเทือน" นี้เสร็จสมบูรณ์ในห้องปฏิบัติการ รับตราพิเศษโดยตรง

เนื่องจากสถานที่นี้ไม่ได้ดำเนินการตรวจสอบทางจุลชีววิทยา วัสดุวินิจฉัยที่รวบรวมไว้จะต้องถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการจากส่วนกลางเพื่อความปลอดภัยของวัสดุในช่วงเวลาระหว่างการนำส่งในตู้เย็นหรือสำหรับสารกันบูดหลายร้อยชนิด จัดส่งวัสดุไปยังห้องปฏิบัติการในกล่องขนส่งที่สามารถฆ่าเชื้อได้ง่าย การทดสอบผิวหนังจะต้องมีฉลากพิสูจน์ และทั้งชุดจะได้รับแบบฟอร์มยืนยันที่กรอกครบถ้วน

รูปแบบและความถี่ของการอดอาหารสำหรับผู้ป่วย

ในกรณีของการวินิจฉัยเบื้องต้นที่เรียกว่าการวินิจฉัยผู้ป่วยวัณโรคจำเป็นต้องติดตามเสมหะอย่างน้อย 3 ส่วนเป็นเวลา 2 หรือ 3 วัน รวบรวมภายใต้การดูแลของบุคลากรทางการแพทย์ซึ่งช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของกล้องจุลทรรศน์

การตรวจคัดกรองวัณโรคเบื้องต้นมีหน้าที่รับผิดชอบในการดำเนินการตามองค์ประกอบทางคลินิกและการวินิจฉัยทั้งหมดของระบบการดูแลสุขภาพ Ostannim เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงสำหรับ PIDVISHSHSHSHSHSHSHNETICAL PROPECTION ของ BAZ Kliniko-DIAGNITY LABORITY ORGANIAL ของ BEAUTRY CENTRICS, ELSOURSED MIROSCOMS I GENTANNES สำหรับ Epistemic Irvyki

ในสถานบริการป้องกันวัณโรค มีการใช้แผนการควิ้ลท์ซึ่งจะส่งเสมหะหรือวัสดุวินิจฉัยอื่น ๆ ไม่น้อยกว่า 3 ครั้งในระยะเวลา 3 วัน ในระหว่างการรักษา การตรวจทางจุลชีววิทยาจะดำเนินการเป็นประจำอย่างน้อยเดือนละครั้งในระหว่างระยะเคมีบำบัดแบบเข้มข้น เมื่อย้ายไปยังระยะติดตามผล การติดตามผลจะดำเนินการน้อยลง - ในช่วงเวลา 2-3 มิลลิวินาที ซึ่งจำนวนการติดตามผลจะลดลงเหลือสอง

คุณสมบัติของการรวบรวมวัสดุวินิจฉัยวัณโรคหลังถูกกฎหมาย

ลักษณะเฉพาะของวัสดุทางพยาธิวิทยาในรูปแบบวัณโรคหลังกฎหมายคือความเข้มข้นต่ำของเชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรคในรูปแบบใหม่ซึ่งต้องใช้วิธีการติดตามทางจุลชีววิทยาที่ละเอียดอ่อนมากขึ้นก่อนอื่นคือวิธีการทางแบคทีเรีย wu บน zhivilne seredovishche

ในกรณีของวัณโรคของระบบ sechostatic ส่วนนี้ถือเป็นวัสดุในการสืบสวนที่ดีที่สุด การรวบรวมส่วนนี้ดำเนินการโดยพยาบาลที่ได้รับการฝึกอบรมมาเป็นพิเศษ

ล้างอวัยวะภายนอกด้วยน้ำและด่างทับทิมอ่อนหรืออ่อน ปิดช่องเปิดด้านนอกของคลอง sechoic อย่างระมัดระวัง จากขวดฆ่าเชื้อ เก็บส่วนตรงกลางของแผล: สำหรับผู้ชาย - ด้วยสารละลายธรรมชาติ สำหรับผู้หญิง - ด้วยความช่วยเหลือของสายสวน การตัดจากชาม Nirka จะถูกรวบรวมลงในหลอดที่ปลอดเชื้อในระหว่างการใส่สายสวน Nirka หนึ่งหรือสองอัน และในกรณีที่เหลือ ผิวหนังจะถูกป้าย ส่วนจำนวนเล็กน้อยเหล่านี้จะถูกปั่นแยกและติดตามตะกอน

ในมนุษย์ น้ำอสุจิ อัณฑะ และต่อมลูกหมากจะถูกปั่นแยกเพื่อกำจัดตะกอน ในกรณีที่มีการแปลกระบวนการเฉพาะในร่างกายมนุษย์ การนวดต่อมส่วนหน้าสามารถกำจัดสารคัดหลั่งที่มองเห็นได้ เพื่อป้องกันเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค

เลือดประจำเดือนจะถูกดูดจากผู้หญิงโดยการดูดหรือใช้ถังของคาฟคา วัสดุที่ถูกเอาออกจะถูกแยกออกจากเซลล์เม็ดเลือดแดงโดยการล้างด้วยน้ำกลั่นและการหมุนเหวี่ยงในภายหลัง การปิดล้อมจะถูกติดตาม

วัสดุจากช่องปากมดลูกของมดลูกจะถูกรวบรวมไว้ในภาชนะหรือถ้วยคาฟคาเพื่อให้สามารถรวบรวมวัสดุทางพยาธิวิทยาได้ 1-2 มิลลิลิตร

วัสดุถูกนำออกไประหว่างปฏิบัติการส่งมอบที่คณะละครสัตว์ หน่วยงานของรัฐ สำหรับการตัดชิ้นเนื้อ, การขูดจากเยื่อบุโพรงมดลูก, ทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน ในการทำเช่นนี้ให้วางไว้ในครกที่ปลอดเชื้อแล้วค่อย ๆ ตัดด้วยกรรไกรที่ปลอดเชื้อ เติมทรายแม่น้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อในปริมาณเล็กน้อยลงในสารแขวนลอยที่สกัดแล้วเติมสารละลายไอโซโทนิก 0.5-1.0 มิลลิลิตรลงในโซเดียมคลอไรด์แล้วบดทุกอย่างจนเละ ครีมพร้อมเติมไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์ (4-5 มล.) จากนั้นปล่อยให้มวลยืนเป็นเวลา 1-1.5 นาที แล้วสังเกตความดัน

วัณโรคของซีสต์และเยื่อเมือก จุด (ฝีที่เน่าเปื่อย) ถูกเอาออกด้วยกระบอกฉีดยาที่ปราศจากเชื้อแล้ววางลงในภาชนะที่ปลอดเชื้อและส่งไปยังห้องปฏิบัติการทันที ใช้ปิเปตที่ผ่านการฆ่าเชื้อชุบด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ทางสรีรวิทยาที่ปราศจากเชื้อแล้วนำหนอง 2-5 มิลลิลิตรใส่ลงในขวดด้วยความน่ารังเกียจแล้วเติมสารละลายไอโซโทนิกของโซเดียมคลอไรด์อีก 2-3 มิลลิลิตร ปิดฝาขวดและทำให้แห้งในชัตเตอร์เป็นเวลา 8-10 นาที มีการตรวจสอบการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันของระบบกันสะเทือน

สำหรับรูปแบบช่องทวารของวัณโรค cystic-subglobal ให้นำของเหลวที่มีหนองออกจากช่องทวาร ราสเบอร์รี่จะถูกรวบรวมโดยตรงในหลอดทดลอง ในกรณีที่มีหนองไม่มีนัยสำคัญ ให้ล้างช่องทวารด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ทางสรีรวิทยาที่ฆ่าเชื้อแล้วเก็บน้ำล้างไว้ในหลอดทดลองหรือส่งผ้าอนามัยแบบสอดที่มีหนองรั่วเพื่อตรวจสอบต่อไป

วัสดุการผ่าตัดที่ถูกถอดออกในระหว่างขั้นตอนการผ่าตัดในซีสต์และมุมอาจประกอบด้วยก้อนหนองที่เป็นเนื้อตาย แกรนูเลชัน เนื้อเยื่อแผลเป็น เนื้อเยื่อซีสติก เนื้อเยื่อของเยื่อหุ้มไขข้อและสารตั้งต้นอื่น ๆ การรักษานี้ควรทำเช่นเดียวกับกรณีวัณโรค

การตรวจทางจุลชีววิทยาของเนื้อเยื่อไขข้อในโซเดียมซิเตรต 3% (ในอัตราส่วน 1: 1) เพื่อป้องกันโรคกล่องเสียงอักเสบควรทำทันทีหลังการเจาะ

วัณโรคของต่อมน้ำเหลือง หนองที่ถูกดึงออกมาระหว่างการเจาะต่อมน้ำเหลืองนั้นสังเกตได้ในลักษณะเดียวกัน เหมือนฝีที่เน่าเปื่อย เนื้อเยื่อของต่อมน้ำเหลืองที่ถูกเอาออกในระหว่างขั้นตอนการผ่าตัด การตัดชิ้นเนื้อ จะสังเกตได้เช่นเดียวกับวัณโรคในรูปแบบอื่น

การทดสอบอุจจาระสำหรับวัณโรค Mycobacterium นั้นดำเนินการน้อยมากเนื่องจากมีผลบวกเกือบเป็นสากล

กล้องจุลทรรศน์ของเชื้อมัยโคแบคทีเรีย

กล้องจุลทรรศน์เสมหะเป็นวิธีที่รวดเร็ว ง่ายดาย และราคาไม่แพง ซึ่งมีหน้าที่ในการกำจัดผู้ที่ต้องสงสัยวัณโรคทุกกรณี นอกจากนี้ การตรวจสอบนี้ยังดำเนินการเพื่อประเมินประสิทธิผลของเคมีบำบัด และเพื่อยืนยันผลลัพธ์ของการรักษาหรือผลการรักษาล่าสุด เมื่อมีผลลัพธ์ของการติดตามผลทางวัฒนธรรม

การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์มี 2 วิธี:

• วิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยตรงเมื่อเตรียมสเมียร์โดยตรงจากวัสดุวินิจฉัย
• วิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ของตะกอนที่เตรียมจากวัสดุที่บำบัดด้วยสารปนเปื้อนเพื่อการตรวจสอบวัฒนธรรม

วิธีแรกคือการศึกษาในห้องปฏิบัติการดังกล่าวซึ่งมีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์เท่านั้น (ห้องปฏิบัติการวินิจฉัยทางคลินิกและการตรวจทางคลินิก)

ผลลัพธ์ที่ดีกว่าของการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์นั้นได้มาจากการทำให้วัสดุที่ใช้ในการวินิจฉัยเข้มข้น (เช่น โดยการปั่นแยก)

ในการตรวจหาเชื้อ Mycobacterium tuberculosis ที่มีความชุก 50% ในระหว่างการส่องด้วยกล้องจุลทรรศน์ เสมหะ 1 มิลลิลิตรสามารถบรรจุเซลล์จุลินทรีย์ได้มากกว่า 5,000 เซลล์ เสมหะของผู้ป่วยที่มีวัณโรคไม่รุนแรงมีแบคทีเรียที่เป็นกรดในระดับสูงซึ่งช่วยให้ตรวจพบได้ชัดเจนในระหว่างการตรวจแบคทีเรีย ความไวในการวินิจฉัยของวิธีนี้สามารถปรับปรุงได้โดยการสังเกตปริมาณเสมหะที่ปล่อยออกมาต่อผู้ป่วยแต่ละราย ผลลัพธ์เชิงลบของการติดตามผลด้วยแบคทีเรียไม่รวมถึงการวินิจฉัยวัณโรค เสมหะของผู้ป่วยบางรายมีเชื้อมัยโคแบคทีเรียน้อยกว่าซึ่งสามารถตรวจพบได้โดยใช้กล้องจุลทรรศน์เพิ่มเติม การเตรียมรอยเปื้อนและเสมหะที่ไม่ดีอาจทำให้เกิดผลเสียจากการติดตามผลทางแบคทีเรีย

วิธีการที่ทันสมัยที่สุดในการตรวจหาเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่รวดเร็วเป็นกรดในสเมียร์คือการสเมียร์ของ Ziehl-Neelsen วิธีการนี้อาศัยการแทรกซึมของคาร์โบลิกฟูกซินเข้าไปในเซลล์จุลินทรีย์ผ่านเมมเบรนที่มีขี้ผึ้ง-ลิพิดบอล โดยการให้ความร้อนเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงและสารกัดกร่อนที่รุนแรงกับฟีนอล จากนั้นใช้สารละลายกรดซัลฟิวริก 25% หรือกรดไฮโดรคลอริก 3% จนกระทั่งโครงสร้างที่ไม่ทนกรดทั้งหมดได้รับการบำบัด เติมเมทิลีนบลูเจือจาง 0.3% ลงในส่วนผสมของสเมียร์ Mycobacteria ไม่ยอมรับ barberries สวรรค์ดั้งเดิมซึ่งเป็นผลมาจากการที่ mycobacteria ที่เป็นกรดอย่างรวดเร็วกลายเป็นสีราสเบอร์รี่ - เชอร์รี่และจุลินทรีย์และองค์ประกอบเซลล์อื่น ๆ กลายเป็นสีดำ

สำหรับ Doslizhzhennya Mazkiv ซึ่งฝังไว้สำหรับ Tsille-Nelsen, กล้องจุลทรรศน์กล้องส่องทางไกล Vikoristovoye Svitliy ของ Zanimsiyym (90 Abo 100-Clot ของ Zbilishnnya) โดยช่องมองภาพ Z 7 Abo 10-shorts ของ zbilshens ติดตามดิน 100 ทุ่งเพื่อตรวจหาเชื้อมัยโคแบคทีเรียเพียงตัวเดียวในสเมียร์ ในกรณีนี้ หากผลการตรวจสอบเป็นลบ ขอแนะนำให้ตรวจสอบอีก 200 ช่องเพื่อยืนยัน บันทึกผลลัพธ์ที่ระบุจำนวนการตรวจพบเชื้อมัยโคแบคทีเรียชนิดรวดเร็วกรด (AFB)

เทคนิคนี้เป็นการผสมผสานการเติมฟลูออโรโครมสำหรับกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ซึ่งช่วยให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุด การใช้วิธีนี้เพิ่มประสิทธิภาพของกล้องจุลทรรศน์ได้ 10-15% เมื่อเก็บตัวอย่างเชื้อมัยโคแบคทีเรียด้วยเพรียงเรืองแสง (ออรามิน โรดามีน ฯลฯ) คำเหล่านี้ยังเกี่ยวข้องกับโครงสร้างคล้ายขี้ผึ้งของเซลล์จุลินทรีย์อีกด้วย เมื่อเซลล์ถูกรบกวนด้วยแหล่งกำเนิดแสงที่ทำงานอยู่ (แสงอัลตราไวโอเลตสเปกตรัมสูง) กลิ่นจะเริ่มเรืองแสงเป็นสีส้มหรือสีแดงสดบนเพลี้ยอ่อนสีดำหรือสีเขียวเข้ม เนื่องจากภาพที่มองเห็นมีความสว่างและคอนทราสต์สูง จึงเป็นไปได้ที่จะลดกำลังขยายภายนอกของกล้องจุลทรรศน์ลงได้ 4-10 เท่า จึงขยายขอบเขตการมองเห็นและเปลี่ยนชั่วโมงในการดูการเตรียมการได้ ด้วยความลึกของความคมชัดที่มากขึ้นอย่างเห็นได้ชัด ความสะดวกสบายในการติดตามจึงสามารถปรับปรุงได้

ด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงคุณภาพสูง สเมียร์แบบแบนจะมองเห็นได้ในเวลาไม่ถึงหนึ่งชั่วโมง เมื่อเทียบกับกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงของสเมียร์ที่เก็บไว้ใน Zielem-Nelsen เนื่องจากนักจุลทรรศน์ตรวจสเมียร์ดังกล่าวประมาณ 20-25 สเมียร์ต่อวันทำงาน จากนั้นเมื่อใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์เพิ่มเติม จึงสามารถสังเกตสเมียร์ได้มากกว่า 60-80 สเมียร์ในชั่วโมงเดียวกัน นักจุลทรรศน์รู้ดีว่าการหมักเซลล์ด้วยออรามีนและโรดามีนนั้นค่อนข้างเฉพาะเจาะจงสำหรับเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่เป็นกรดซึ่งมีลักษณะเป็นแท่งสีทอง Saprophytes เตรียมเป็นสีเขียว

ข้อดีที่สำคัญอีกประการหนึ่งของวิธีการใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์คือความสามารถในการตรวจจับการเปลี่ยนแปลงในมัยโคแบคทีเรียที่สูญเสียไปภายใต้ปัจจัยที่ไม่เอื้ออำนวยหลายประการ รวมถึงเคมีบำบัดแบบเข้มข้น และความสามารถในการต้านทานความร้อนจะไม่ถูกสังเกตโดยเกี่ยวข้องกับไซม์เมื่อเตรียมด้วย Zielem-Neelsen .

ข้อเสียของวิธีกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์คือความน่าเชื่อถือและการทำงานของกล้องจุลทรรศน์ในระดับสูง อย่างไรก็ตาม ในห้องปฏิบัติการแบบรวมศูนย์หรือห้องปฏิบัติการขนาดใหญ่อื่น ๆ บรรทัดฐานจะมีน้ำหนักเกินบรรทัดฐานของผู้ช่วยห้องปฏิบัติการ 3 คนที่ทำงานกับกล้องจุลทรรศน์หลัก 3 ตัว ซึ่งมีราคาถูกกว่าการเปลี่ยนกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ตัวเดียว

วิธีการส่องกล้องแบคทีเรียสามารถบรรลุความจำเพาะสูง (89-100%) เกือบ 97% ของผลลัพธ์เชิงบวกที่ได้จากกล้องจุลทรรศน์ได้รับการยืนยันอย่างชัดเจนจากผลการเพาะเลี้ยง

จำเป็นต้องทราบว่าด้วยการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ของสเมียร์ของวัสดุทางพยาธิวิทยาก็เป็นไปได้ที่จะระบุชนิดของมัยโคแบคทีเรียที่เป็นกรดที่ตรวจพบได้ วิธีการใช้กล้องจุลทรรศน์ทำให้สามารถตรวจจับการมีอยู่ของจุลินทรีย์ที่เป็นกรดอย่างรวดเร็วในการเตรียม ซึ่งอธิบายได้จากการค้นพบในธรรมชาติของจุลินทรีย์ Mycobacteria tuberculosis ที่ซับซ้อนทางสัณฐานวิทยาที่คล้ายกันจำนวนมาก จุลินทรีย์ทนกรดเย็น netuber

การประเมินผลการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์จะแสดงเป็นหน่วยเล็กๆ

เพื่อเปรียบเทียบผลลัพธ์ของวิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบต่างๆ สามารถใช้ค่าสัมประสิทธิ์เชิงประจักษ์ได้ ตัวอย่างเช่น เพื่อเปรียบเทียบผลลัพธ์ของการตรวจสเมียร์ติดตามผลที่เตรียมด้วยเพรียงเรืองแสงกับข้อมูลกล้องจุลทรรศน์แบบแสง-แสง (เพิ่มขึ้น 1,000 เท่า) จำเป็นต้องแยกจุลินทรีย์ที่เป็นกรดอย่างรวดเร็ว เกณฑ์ที่ระบุด้วยความช่วยเหลือของ กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง เพื่อให้ได้ค่าสัมประสิทธิ์เฉพาะเมื่อเพิ่มขึ้น 250 เท่าในกล้องจุลทรรศน์ - 10 เท่า, ที่ 450 เท่า - 4 เท่า, โดย 630 เท่า - 2 เท่า

คุณสมบัติของกล้องจุลทรรศน์ในวัณโรคหลังถูกกฎหมาย

ดำเนินการด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยตรง เช่นเดียวกับกล้องจุลทรรศน์ของสเมียร์ที่เตรียมหลังจากการเสริมสมรรถนะด้วยการเติม Ziehl-Neelsen หรือ Barberries ที่เรืองแสงเพิ่มเติม กล้องจุลทรรศน์สเมียร์โดยตรงไม่ได้ผลเนื่องจากมีความเข้มข้นของมัยโคแบคทีเรียในวัสดุต่ำ ดังนั้นจึงมีเหตุผลมากกว่าที่จะใช้วิธีการเสริมสมรรถนะ วิธีที่มีประสิทธิภาพที่สุดคือการหมุนเหวี่ยง เนื่องจากวัสดุชีวภาพมีความหนืด การหมุนเหวี่ยงด้วยการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันหนึ่งชั่วโมงและการเจือจางของวัสดุจึงควรดำเนินการโดยใช้เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูงที่มีแรงเหวี่ยง 3000 กรัมและไฮโปคลอไรต์ วิธีการเสริมสมรรถนะอื่นๆ เช่น microflotation ปัจจุบันไม่ได้ขึ้นอยู่กับการสร้างละอองลอยที่ไม่ปลอดภัยทางชีวภาพ

วิธีการทางวัฒนธรรมเพื่อวินิจฉัยวัณโรค

วิธีการหว่านหรือวิธีการเพาะเลี้ยงนั้นมีความไวมากกว่าการใช้กล้องจุลทรรศน์สเมียร์ และสามารถใช้ได้ก่อนการทดสอบที่เหลือ ช่วยให้สามารถตรวจจับเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่มีชีวิตชีวาหลายสิบตัวในวัสดุที่ศึกษาและมีคุณค่าในการวินิจฉัยที่ดี สิ่งนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งในกรณีที่มีการวิจัยวัสดุตั้งแต่การตรวจพบหรือการรักษาครั้งแรกของผู้ป่วยที่แสดงเชื้อมัยโคแบคทีเรียจำนวนน้อย

เมื่อเปรียบเทียบกับกล้องจุลทรรศน์ การตรวจสอบทางวัฒนธรรมจะช่วยเพิ่มจำนวนผู้ป่วยที่ได้รับการวินิจฉัยว่าเป็นวัณโรคได้ 15-25% และยังช่วยยืนยันวัณโรคในระดับที่มากขึ้นอีกด้วย ระยะแรก,ถ้าใครป่วยก็คล้อยตามการรักษามากขึ้น ข้อได้เปรียบที่สำคัญมากของการวิจัยทางวัฒนธรรมคือความสามารถในการแยกวัฒนธรรมของสัตว์ ซึ่งสามารถระบุและปลูกฝังได้โดยความไวต่อยา ความรุนแรง และฤทธิ์ทางชีวภาพอื่นๆ

ก่อนวิธีการเพาะปลูกบางวิธีสิ่งสำคัญคือต้องสังเกตเรื่องไม่สำคัญ (ระยะเวลาการทำให้บริสุทธิ์ของวัสดุถึง 10 ปี) มีความยืดหยุ่นและความสะดวกในการประมวลผลวัสดุวินิจฉัยมากขึ้น

หลักการประมวลผลวัสดุวินิจฉัยก่อนการปลูก

ไม่สามารถใช้เทคนิคทางจุลชีววิทยาดั้งเดิมในการเฝ้าระวังวัณโรคได้ สิ่งนี้เชื่อมโยงกับสิ่งนี้ ขณะนี้ เป็นไปได้ที่เชื้อ Mycobacterium tuberculosis จะเติบโตเพิ่มมากขึ้น และตัวอย่างวัสดุทางคลินิกส่วนใหญ่ประกอบด้วยจุลินทรีย์และเชื้อราที่ทำให้เกิดไพโอนิกและเน่าเปื่อยที่เติบโตในของเหลว การเจริญเติบโตของฟองบนหลอดเลือดดำที่อุดมสมบูรณ์ช่วยป้องกันการพัฒนาของมัยโคแบคทีเรียและไม่อนุญาตให้ตรวจพบวัณโรคดังนั้นก่อนที่จะหยอดเมล็ดวัสดุการวินิจฉัยจะต้องถูกสุ่มตัวอย่างเบื้องต้น นอกจากนี้เชื้อมัยโคแบคทีเรียซึ่งมองเห็นได้จากอาการไอของผู้ป่วยมักจะถูกขับออกมาโดยมีเมือกจำนวนมากซึ่งทำให้ยากสำหรับพวกเขามีสมาธิ ในการเชื่อมต่อกับสิ่งนี้ก่อนที่จะหยอดเสมหะและวัสดุอื่นที่คล้ายคลึงกันจำเป็นต้องเจือจางและฆ่าเชื้อพวกมัน

ผงซักฟอกและสารปนเปื้อนทั้งหมดอาจเป็นพิษต่อมัยโคแบคทีเรียไม่มากก็น้อย จากการสุ่มตัวอย่าง สามารถฆ่าเชื้อมัยโคแบคทีเรียได้มากถึง 90% เพื่อรักษาส่วนที่เพียงพอของประชากรมัยโคแบคทีเรียจำเป็นต้องใช้วิธีการกำจัดที่อ่อนโยนซึ่งในด้านหนึ่งสามารถปกปิดหนองที่เติบโตเป็นของเหลวและจุลินทรีย์ที่เน่าเปื่อยได้และในอีกด้านหนึ่ง อะไร - เพื่อปกป้องให้มากที่สุด ความมีชีวิตชีวาของเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่มีอยู่ในวัสดุให้มากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้

ขั้นตอนของความเป็นเนื้อเดียวกันและความแออัดของมันสำหรับการเพาะปลูกไวคอร์ก่อนการปลูกนั้นใช้สำหรับสารปนเปื้อนต่างๆ: สำหรับเสมหะ - สำหรับการบำบัดโซเดียมไฮดรอกไซด์ 4%, สำหรับการบำบัดโซเดียมฟอสเฟตไตรทดแทน 10%, เบนซีน lconium คลอไรด์ ไตรโซเดียมฟอสเฟต, NALC-NaOH (N-acetyl-L-cysteine ​​\u200b\u200bโซเดียมไฮดรอกไซด์) ที่มีความเข้มข้นสุดท้ายคือ NaOH 1% สำหรับการแยกและวัสดุหายากอื่น ๆ - กรดซัลฟิวริก 3% สำหรับตัวอย่างหมักเพื่อกำจัดวัสดุไขมัน - กรดออกซาลิก มากถึง 5% นอกจากนี้ ในบางกรณี เอนไซม์และสารออกฤทธิ์ที่พื้นผิว (ผงซักฟอก) ก็ถูกสร้างขึ้นด้วย ความเมื่อยล้าของของแข็งและผงซักฟอกอื่น ๆ มาพร้อมกับการทำลายเซลล์มัยโคแบคทีเรียน้อยลง (อยู่รอดได้ 40-50%) ใช้ได้กับวัสดุหายากเท่านั้น การขยายตัวที่ยิ่งใหญ่ที่สุดในโลกคือการกำจัด NALC-NaOH มีจำหน่ายเป็นชุด วิธีนี้ทำให้สามารถมองเห็นประชากรเชื้อมัยโคแบคทีเรียได้มากกว่า 85% การขจัดการปนเปื้อนของวัสดุแข็งที่มีเนื้อเยื่อมีความสำคัญมากกว่า เนื่องจากเป็นการยากที่จะคาดเดาระดับการกระจายตัวของวัสดุในระหว่างกระบวนการทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน ตัวอย่างเช่น การเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อต่อมน้ำเหลืองมักจะมาพร้อมกับความถี่ที่เพิ่มขึ้นของการปนเปื้อนจากพืชของบุคคลที่สาม ในกรณีนี้ คุณสามารถใช้เอโทเนีย 1% ได้

วัสดุที่ไม่เป็นเนื้อเดียวกันจะถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้เม็ดแก้วต่อหน้าสารปนเปื้อน วัสดุหายากจะถูกปั่นแยกก่อน และตัวอย่างจะถูกนำไปตกตะกอนเดี่ยว

เทคนิคการหว่านและการฟักไข่

หลังจากการประมวลผลครั้งแรก วัสดุจะถูกปั่นแยก ซึ่งเปลือกของสารนั้นจะถูกตกตะกอนโดยมัยโคแบคทีเรีย และส่งเสริมการแทนที่ในตะกอน ("การเพิ่มคุณค่าของตะกอน") กำจัดตะกอนโดยการทำให้เป็นกลางและปลูกเชื้อบนพื้นผิวของสิ่งมีชีวิตขนาดใหญ่หรือหลอดทดลองด้วยสื่อที่หายาก (เป็นอันตราย) ในระหว่างการปิดล้อม จะมีการเตรียมรอยเปื้อนเพื่อการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ เทคนิคการเพาะเลี้ยงมีแนวโน้มที่จะหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามของวัสดุที่ใช้วินิจฉัย

สำหรับการตีความทางคลินิกที่เชื่อถือได้ของผลการตรวจทางจุลชีววิทยาจำเป็นต้องปฏิบัติตามกฎต่อไปนี้: การตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์และวัฒนธรรมจะต้องดำเนินการควบคู่กัน นี่คือตัวอย่างของวัสดุการวินิจฉัย

วางหลอดที่ฉีดวัคซีนไว้ในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37 o C เป็นเวลา 2 นาทีในแนวนอน สิ่งนี้จะช่วยให้แน่ใจว่าวัสดุในแกนตัวเรือนจะดูดซับได้สม่ำเสมอยิ่งขึ้น หลังจากเติมเข้าไป 2 ครั้ง ให้ย้ายท่อไปยังตำแหน่งแนวตั้งแล้วปิดผนึกอย่างแน่นหนาด้วยหมากฝรั่งหรือจุกซิลิโคน เพื่อป้องกันไม่ให้สื่อแห้ง

ควรเก็บการหว่านไว้ในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 10-12 วัน โดยมีการตรวจสอบเป็นประจำ ในระหว่างการตรวจสอบการควบคุมผิวหนัง พารามิเตอร์ต่อไปนี้จะถูกบันทึก:

• คำศัพท์สำหรับการเติบโตที่มองเห็นได้ตั้งแต่วันที่หว่าน
• ความเข้มข้นของการเติบโต (จำนวนสถานประกอบการเชิงพาณิชย์)
• การขัดขวางการหว่านโดยพืชหรือเชื้อราจากจุลินทรีย์แปลกปลอม (ถอดหลอดทดลองดังกล่าวออก)
• ปริมาณการเติบโตที่มองเห็นได้ วางท่อไว้ในเทอร์โมสตัทจนกว่าจะมีการตรวจเพิ่มเติม

ที่อยู่อาศัย

สำหรับการเพาะเลี้ยงมัยโคแบคทีเรียนั้นมีการใช้สื่อสดหลายชนิด หนาตรงกันข้ามหายาก อย่างไรก็ตาม เราคาดหวังว่าสภาพแวดล้อมในการดำรงชีวิตไม่จำเป็นต้องมีหน่วยงานกำกับดูแลการเจริญเติบโตของเซลล์มัยโคแบคทีเรียทั้งหมด ด้วยเหตุนี้ เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพ ขอแนะนำให้จัดเก็บพืชผล 2-3 รายการในคลังสินค้าอื่นในแต่ละครั้ง

WHO แนะนำให้ใช้สื่อ Lowenstein-Jensen ในฐานะสื่อมาตรฐานสำหรับการวินิจฉัยวัณโรคเบื้องต้นและการประเมินความไวของยา มีสื่อไข่แข็งเพื่อให้มัยโคแบคทีเรียเจริญเติบโตได้ในวันที่ 20-25 หลังจากการเพาะเชื้อด้วยวัสดุที่ให้ผลบวกจากแบคทีเรีย การเพาะเชื้อของสารลบแบคทีเรียจะคงอยู่นานกว่าระยะฟักตัวทั้งหมด (สูงสุด 10-12 วัน)

ในภูมิภาคของเรา ความกว้างของเนบิวลาถูกเสนอโดย E.R. ไฟโนมของศูนย์ไข่ Finn-II เป็นที่น่าสนใจที่แทนที่จะเป็น L-asparagine จะมีโมโนโซเดียมกลูตาเมตซึ่งกระตุ้นให้เกิดวิถีอื่นในการสังเคราะห์กรดอะมิโนโดยมัยโคแบคทีเรีย การเจริญเติบโตจะปรากฏในช่วงต้นของช่วงกลาง และความถี่ในการมองเห็นเชื้อมัยโคแบคทีเรียจะสูงขึ้น 6-8% ซึ่งต่ำกว่าในช่วงกลางของ Lowenstein-Jensen

เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการวินิจฉัยทางแบคทีเรียของวัณโรคหลังการเป็นอยู่ จำเป็นต้องรวมสื่อ Finn-II ที่ดัดแปลงไว้ในคอมเพล็กซ์ของสื่อที่มีชีวิต เพื่อเร่งการเติบโตของโฮสต์ Finn-II ในโฮสต์ ให้แนะนำโซเดียมไธโอไกลโคเลต 0.05% เพิ่มเติมซึ่งจะช่วยลดความเข้มข้นของกรด เพื่อปกป้องระบบเอนไซม์ของมัยโคแบคทีเรียจากผลิตภัณฑ์ที่เป็นพิษของลิพิดเปอร์ออกซิเดชันในตัวเรือน Finn-II ให้แนะนำสารต้านอนุมูลอิสระ α-โทโคฟีรอล อะซิเตตที่ความเข้มข้น 0.001 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร การฉีดวัคซีนวินิจฉัยจะดำเนินการโดยใช้วิธีมาตรฐาน

ห้องปฏิบัติการต่อต้านวัณโรคในรัสเซียใช้การเอาชนะและการดัดแปลงสื่อมีชีวิตขนาดใหญ่อื่นๆ จดทะเบียนโดย G.G. ศูนย์ชีวิตมอร์โดเวียน "โนวา" พัฒนาโดย V.A. Anikina Living Media A-6 และ A-9 และอื่นๆ

ด้วยเหตุนี้ในกระบวนการทำเคมีบำบัดจึงเกิดการหยุดชะงักของระบบเมตาบอลิซึมต่างๆ ของเซลล์จุลินทรีย์ ประชากรมัยโคแบคทีเรียส่วนหนึ่งจึงสูญเสียความสามารถในการพัฒนาของเหลวที่มีชีวิตตามปกติในสภาพแวดล้อม และส่งเสริมของเหลวที่มีชีวิตที่สมดุล (ทั้งที่เป็นอันตรายหรือหายาก)

การประเมินและการนำเสนอผลการเพาะเลี้ยงของวัสดุวินิจฉัย

เชื้อมัยโคแบคทีเรียทุกประเภทและสปีชีส์เติบโตอย่างรวดเร็ว การเจริญเติบโตอาจปรากฏจนถึงวันที่ 90 จำนวนพืชผลดังกล่าวมีน้อย แต่จำเป็นต้องทำให้พืชมีชีวิตชีวาในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 2.5-3 เดือน

การเพาะเชื้อที่มีความรุนแรงของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคทำให้เกิดการเจริญเติบโตบนแกนไข่ขนาดใหญ่ในรูปแบบของโคโลนีรูปแบบ R ที่มีขนาดและประเภทต่างกัน อาณานิคมจะแห้ง มีรอยย่น สีงาช้าง มีเม็ดสีอ่อนๆ ในสภาพแวดล้อมอื่น อาณานิคมของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis อาจมีความรุนแรงมากกว่า หลังจากทำเคมีบำบัดหรือในระหว่างขั้นตอนการรักษา อาจมองเห็นโคโลนีเรียบที่มีการเจริญเติบโตยาว (รูปตัว S) ได้

เมื่อพบวัฒนธรรมที่มีชัยชนะ จะมีการตรวจสอบพิเศษที่ซับซ้อนเพื่อให้สามารถระบุเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคจากเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่ไม่ใช่วัณโรคและกรดซาโปรไฟต์

การยืนยันเชิงบวกจะเกิดขึ้นหลังจากการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์กล้ามเนื้อและกระดูกของสเมียร์ Ziehl-Neelsen กับโคโลนีที่เจริญเต็มที่ เมื่อเชื้อมัยโคแบคทีเรียเติบโตเป็นรอยเปื้อน จะเผยให้เห็นแท่งสีแดงสดที่วางอยู่ตามลำพังหรือเป็นกลุ่ม ซึ่งทำให้เกิดการสะสมในลักษณะที่ปรากฏทั่วทั้งร่างกาย ในวัฒนธรรมยุคใหม่ โดยเฉพาะอย่างยิ่งผู้ที่ได้รับการบำบัดอย่างหนักด้วยยาเคมีสำหรับการเจ็บป่วย เชื้อมัยโคแบคทีเรียแสดงความหลากหลายอย่างมีนัยสำคัญ แม้กระทั่งจนถึงจุดที่เผยให้เห็นรูปแบบสั้นที่มีลักษณะคล้ายแท่งจำนวนหนึ่ง ซึ่งอาจมีลักษณะคล้าย coccoid หรือแม้แต่พันธุ์ที่ยาวกว่านั้น antiv, เพื่อเดาเส้นใยของเห็ด

ความรุนแรงของการเจริญเติบโตของเชื้อมัยโคแบคทีเรียจะถูกระบุตามรูปแบบก้าวหน้า: (+) - 1-20 KUO ในตัวอย่าง (การเจริญเติบโตของแบคทีเรียเล็กน้อย); (++) - 20-100 KUO ในตัวอย่าง (แบคทีเรียที่เป็นพิษ) (+++) -> 100 KUO ในตัวอย่าง (แบคทีเรีย) เมื่อวินิจฉัยวัณโรคในห้องปฏิบัติการ หลักฐานของเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่ตรวจพบด้วยวิธีใดวิธีหนึ่งหรือวิธีอื่นนั้นไม่เพียงพอ มีคำอธิบายโดยละเอียดเกี่ยวกับภาระผูกพันและลักษณะของประชากรมัยโคแบคทีเรีย คลังสินค้า และพลังงาน ข้อมูลนี้ช่วยให้คุณตีความกระบวนการได้อย่างถูกต้อง วางแผนกลยุทธ์ และแก้ไขการรักษาได้ทันที

ใน หินที่เหลือเพื่อเร่งการเติบโตของมัยโคแบคทีเรีย อาหารเลี้ยงเชื้อจึงถูกเตรียมบนวุ้นที่มีสารเติมแต่งการเจริญเติบโตต่างๆ และส่วนผสมของก๊าซพิเศษ หากต้องการหยุดการเติบโตของมัยโคแบคทีเรียบนอาหารเหล่านี้ระหว่างการเพาะปลูก ให้สร้างบรรยากาศที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ (4-7%) เพื่อจุดประสงค์นี้จึงใช้ตู้ฟัก CO 2 พิเศษ อย่างไรก็ตาม การพัฒนาที่ยิ่งใหญ่ที่สุดเกิดขึ้นได้ด้วยระบบอัตโนมัติสำหรับการเพาะเลี้ยงมัยโคแบคทีเรีย: MGIT-BACTEC-960 และ MB / Bact

หนึ่งในระบบเหล่านี้คือระบบ MGIT (ท่อบ่งชี้การเจริญเติบโตของเชื้อมัยโคแบคทีเรีย) ซึ่งย้อนกลับไปถึงการพัฒนาเทคโนโลยีชั้นสูง และมีไว้สำหรับการวินิจฉัยทางแบคทีเรียอย่างรวดเร็วของวัณโรค และการพิจารณาความไวของเชื้อมัยโคแบคทีเรียต่อยากลุ่มแรกและยาอื่นๆ MGIT มุ่งเน้นไปที่อุปกรณ์จัดเก็บข้อมูล VASTES-960 เพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ในหลอดพิเศษด้วยอาหารเลี้ยงชีพหายากโดยใช้อาหาร Middlebrook-7H9 ที่ได้รับการดัดแปลง เพื่อกระตุ้นการเจริญเติบโตของเชื้อมัยโคแบคทีเรียและยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์จากภายนอก จึงมีการใช้อาหารเสริม MGIT Growth และส่วนผสมของยาต้านแบคทีเรีย PANTA

การเจริญเติบโตของจุลินทรีย์จะถูกบันทึกด้วยสายตา มันขึ้นอยู่กับการเรืองแสงซึ่งเกิดขึ้นเมื่อกรดถูกดูดซับโดยมัยโคแบคทีเรียในระหว่างการเจริญเติบโต บาร์เบอร์รี่ฟลูออโรโครมรสเปรี้ยววางอยู่ที่ด้านล่างของหลอดพิเศษและปิดด้วยลูกบอลซิลิโคน เชื้อมัยโคแบคทีเรียจะถูกคูณจนกระทั่งความเป็นกรดในหลอดทดลองเปลี่ยนไปและความเข้มข้นลดลง ส่งผลให้มีการเรืองแสงเพิ่มขึ้น ซึ่งมองเห็นได้เมื่อหลอดทดลองสัมผัสกับแสงอัลตราไวโอเลต และบันทึกโดยอัตโนมัติโดยเซ็นเซอร์ภาพที่ติดตั้งในอุปกรณ์ VASTES-960 ความเข้มของแสงจะถูกบันทึกเป็นหน่วยการเจริญเติบโต (หน่วยการเจริญเติบโตของ GU) ข้อมูลที่เพิ่มขึ้นจะถูกป้อนลงในคอมพิวเตอร์ ซึ่งสามารถบันทึกได้โดยอัตโนมัติ การวิเคราะห์กราฟการเจริญเติบโตด้วยคอมพิวเตอร์สามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับการตรวจหาเชื้อมัยโคแบคทีเรียกลุ่มต่างๆ รวมถึงเชื้อที่ไม่ใช่วัณโรค และยังช่วยประเมินพลังการเติบโตของเชื้อมัยโคแบคทีเรียอีกด้วย

จากผลของการนำระบบดังกล่าวไปใช้ ชั่วโมงในการเติบโตของมัยโคแบคทีเรียจึงสั้นลงอย่างมาก โดยคิดเป็นค่าเฉลี่ย 11 วันใน VASTES-960 และ 19 วันสำหรับ MB / Bact เทียบกับ 33 วันในอาหารเลี้ยงเชื้อขนาดใหญ่มาตรฐาน สิ่งสำคัญคือต้องทราบว่าระบบเหล่านี้ต้องการบุคลากรที่มีคุณสมบัติสูง การหว่านวัสดุบนสื่อหายากจะต้องควบคู่ไปกับการหว่านบนสื่อ Lowenstein-Jensen ซึ่งมีบทบาทเป็นตัวสำรองในการระบาดเหล่านี้ หากไม่อนุญาตให้เชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคเติบโตบนสื่ออื่น

ความสำคัญของความไวต่อยาของเชื้อมัยโคแบคทีเรีย

ช่วงและระดับความไวของเชื้อมัยโคแบคทีเรียต่อยาต้านวัณโรคมีความสำคัญทางคลินิกที่สำคัญ เช่นเดียวกับการประเมินทางระบาดวิทยาของการขยายตัวของวัณโรคที่มีการดื้อยา นอกจากนี้ การติดตามการดื้อยายังทำให้สามารถประเมินประสิทธิผลของโปรแกรมต่อต้านวัณโรคโดยรวมได้ โดยเป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญของการทำงานของแนวทางต่อต้านวัณโรคในคลังสินค้าทั้งหมด

ความถี่และเงื่อนไขของความไวต่อยา:

• จนถึงจุดเริ่มต้น ใช้เพียงครั้งเดียวเพื่อกำหนดกลยุทธ์และกลวิธีในการรักษา:
• เมื่อแยกเชื้อที่เป็นโรคออกจากวัสดุที่แตกต่างกัน (เสมหะ BAL น้ำอสุจิ สารหลั่ง สุรา ฯลฯ) ตัวอย่างทุกประเภทจะถูกติดตาม:
• เมื่อสิ้นสุดระยะการรักษาอย่างเข้มข้น ขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงทางคลินิกและรังสีวิทยา:
• หากจำเป็นให้เปลี่ยนวิธีการรักษาตาม:
  • vіdatnosti negativnosti เสมหะ;
  • มองเห็นวัฒนธรรมอีกครั้งหลังเสมหะเชิงลบ
  • ปริมาณ AFB ในสเมียร์เพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วหลังจากที่ซังลดลง เป็นที่ทราบกันดีว่าจากวัสดุผู้ป่วยที่เป็นวัณโรค เราสามารถเห็นเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคสายพันธุ์ต่างๆ ในแง่ของความไวของยา ความไวของสายพันธุ์ต่อยาต้านวัณโรคอาจแตกต่างกันไปตามสเปกตรัมของยา ระยะ ความถี่ และความเร็วของการดื้อยา

ระดับการดื้อยาของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis นั้นพิจารณาจากการสร้างเกณฑ์ซึ่งมุ่งเน้นไปที่ความสำคัญทางคลินิกของการดื้อยาและอยู่ที่ระดับของฤทธิ์ต้านวัณโรคของยาเภสัชจลนศาสตร์ความเข้มข้นในช่วงกลางของการเพิ่มขึ้น ปริมาณการรักษาสูงสุดจะแตกต่างกัน

ปัจจุบันการประเมินความไวต่อยาของเชื้อมัยโคแบคทีเรียดำเนินการโดยใช้วิธีทางจุลชีววิทยา:

• ความเข้มข้นสัมบูรณ์ (วิธีการเจือจางสื่อสิ่งมีชีวิตที่แข็งแกร่งหรือหายาก)
• สัดส่วน,
• ค่าสัมประสิทธิ์ความต้านทาน

แม้ว่าการคงอยู่จะปรากฏในการเจริญเติบโตของโคโลนีของเชื้อมัยโคแบคทีเรียม วัณโรค ที่เฝ้าสังเกตด้วยสายตา แต่ก็มีวิธีการที่กระตุ้นให้เกิดการเจริญเติบโตในระยะแรกของเชื้อมัยโคแบคทีเรีย d ปฏิกิริยาสี วิธีการเหล่านี้ช่วยลดระยะเวลาในการทำการทดสอบจาก 3-4 วันเหลือ 2 วัน

Yak UNIFIKOVA ในกลุ่มภาคต่อของคำแนะนำของความคิดเห็นของขนมปัง, วิธีการเข้มข้นแบบสัมบูรณ์, จุดที่เป็นระบบของ Zorosty, ร้อยแก้วของ vicoline ของ viconnia มาตรฐานของขั้นตอนห้องปฏิบัติการ การทดสอบความไวต่อยาประกอบด้วยชุดหลอดที่มีของเหลวที่มีชีวิตซึ่งดัดแปลงด้วยยาต้านวัณโรค ในชุดประกอบด้วยหลอดทดลอง 2-3 หลอดที่มีความเข้มข้นต่างกันของการเตรียมผิวหนังและไวโคริน หลอดทดลองควบคุม 1 หลอดที่มีตัวกลางที่ไม่มีตัวยา และหลอดทดลอง 1 หลอดที่มีน้ำลาย 1,000 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ชั้นของโซเดียมหรือกรดพาราไนโตรเบนโซอิก 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ตรวจจับการเจริญเติบโตของเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่ไม่ใช่วัณโรค

ในการเตรียมสื่อที่มีการเตรียม Vicorist ให้ใช้สื่อ Lowenstein-Jensen ที่ได้รับการดัดแปลง (ไม่มีแป้ง) แล้วเทลงในขวด ในผิวหนังและขวด ให้เพิ่มยาต้านวัณโรคในขนาดที่กำหนด ผสมขวดให้ละเอียดเทลงในหลอดทดลองแล้วเผาในตำแหน่งต่ำเป็นเวลา 40 นาทีที่อุณหภูมิ 85 ° C แนะนำให้ผสมส่วนผสมในหม้อต้มน้ำไฟฟ้าพร้อมระบบควบคุมอุณหภูมิอัตโนมัติ เซเรดากับยาต้านวัณโรค

แถวที่ 1 สามารถเก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 2-4 ° C ได้นาน 1 เดือน โดยการเตรียมแถวที่ 2 - ไม่เกิน 2 วัน การเก็บผลิตภัณฑ์ที่มียาไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นสิ่งที่ยอมรับไม่ได้ เมื่อเตรียมยาต้านวัณโรคชนิดต่างๆ ให้ตรวจสอบกิจกรรม ความเข้มข้น ปรับตามน้ำหนักโมเลกุลของส่วนที่ไม่เฉพาะเจาะจงของยา ความบริสุทธิ์ ฯลฯ เพื่อเพิ่มความไวต่อยา ให้ใช้เฉพาะสารเคมีบริสุทธิ์เท่านั้น

หลักการของวิธีการนี้ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นเฉพาะของยาต้านวัณโรคซึ่งยับยั้งการเจริญเติบโตของประชากรเชื้อมัยโคแบคทีเรียส่วนสำคัญ เมื่อตีความอย่างถูกต้องวิธีนี้จะมีความน่าเชื่อถือที่ดี

ก่อนทำการทดสอบ จำเป็นต้องตรวจสอบให้แน่ใจว่ามองเห็นการเพาะเลี้ยงเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคได้และไม่มีจุลินทรีย์จากภายนอก สารแขวนลอยเดี่ยวเตรียมจากการเพาะเชื้อมัยโคแบคทีเรียในโซเดียมคลอไรด์ 0.9% ที่มีจุลินทรีย์ 500 ล้านตัวต่อ 1 มิลลิลิตร (มาตรฐานภัยพิบัติทางแสง 5 หน่วย) เจือสารแขวนลอยที่สกัดแล้วด้วยโซเดียมคลอไรด์ 0.9% (1:10) และเติมสารแขวนลอย 0.2 มล. ลงในหลอดทดลองบนผิวหนังไปยังชุดของสิ่งมีชีวิต ท่อที่เพาะไว้จะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทที่ 37 ° C และกวนในแนวนอนเป็นเวลา 2-3 เดซิเบลเพื่อให้พื้นผิวที่เอียงของศูนย์สิ่งมีชีวิตได้รับการฉีดวัคซีนอย่างสม่ำเสมอด้วยการระงับเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค จากนั้นย้ายท่อไปยังตำแหน่งแนวตั้งแล้วฟักโดยยืดเป็น 3-4 เส้น เห็นผลใน 3-4 ปี

ระยะเวลาการสังเกตชีวิตประจำวันจากวัสดุทางคลินิกบนสื่อมีชีวิตจะต้องไม่น้อยกว่า 1-1.5 เดือนผลของความไวของยาที่กำหนดโดยใช้วิธีการที่กำหนดสามารถรับได้ไม่ช้ากว่าหลังจาก 2-2.5 เดือน สำหรับการหว่านวัสดุ นี่เป็นหนึ่งในข้อบกพร่องหลักของวิธีนี้

ตีความผลการทดสอบความไวของยาของเชื้อมัยโคแบคทีเรียตามเกณฑ์เก่า ในสื่อขนาดใหญ่ การเพาะเลี้ยงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องไวต่อความเข้มข้นของยาที่วางอยู่ในสื่อ เนื่องจากจำนวนอาณานิคมของเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่เติบโตในตัวอย่างที่กำหนดให้พร้อมกับยานั้นไม่เกิน 20 โดยมีการเจริญเติบโตที่ชัดเจนและใน ควบคุมตัวอย่างโดยไม่ต้องใช้ยา หากตรวจพบโคโลนีมากกว่า 20 โคโลนีเท่านั้น การเพาะเลี้ยงจะถูกประเมินว่าต้านทานต่อความเข้มข้นนี้ ในทางปฏิบัติเมื่อได้ผลลัพธ์แล้ว การเพิ่มขึ้นในหลอดทดลองสุดท้ายจะอยู่ที่ประมาณ 20 KUO จำเป็นต้องรับทราบทางคลินิกว่าความไวหรือความคงอยู่ในตอนนี้มีลักษณะเล็กน้อย ดังนั้นในบางกรณีเราสามารถอธิบายพลวัตของตัวชี้วัดทางคลินิกที่ไม่ชัดเจนได้

สำหรับยาบางชนิด มีการกำหนดความเข้มข้นเฉพาะเพื่อป้องกันการแพร่กระจายในส่วนสำคัญของประชากรมัยโคแบคทีเรีย ความเข้มข้นเหล่านี้เรียกว่า "วิกฤต" เป็นเกณฑ์สำหรับการดื้อต่อ vikorist จะกำหนดจำนวนการเติบโตของประชากรมัยโคแบคทีเรียในสภาพแวดล้อมที่มีชีวิตด้วยยาที่ความเข้มข้นวิกฤต

ในการปฏิบัติงานด้านเภสัชจลนศาสตร์ในปัจจุบัน โดยมีการกำหนดการดื้อยา ไม่จำกัดเพียงความเข้มข้นวิกฤตเท่านั้น สิ่งนี้เชื่อมโยงกับสิ่งนี้ ว่าการดื้อยาที่ขยายออกไปช่วยให้แพทย์สามารถกำหนดกลยุทธ์การรักษาด้วยเคมีบำบัดได้ดีขึ้น ความรู้ vikoryst เกี่ยวกับความแรงของยาผสมนี้ ถ่ายโอนความต้านทานการเปลี่ยนแปลงหรือความเมื่อยล้าของยาที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นของกลุ่มยาต้านวัณโรคที่มีฤทธิ์รุนแรง

วิธีการหาความเข้มข้นสัมบูรณ์เป็นวิธีที่ง่ายที่สุด แต่ยังเป็นวิธีที่ไวที่สุดต่อค่าเผื่อวิคอนของคุณด้วย เชื่อถือได้มากขึ้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อมีความไวต่อยาอย่างมีนัยสำคัญในแถวที่ 2 และเราขยายตำแหน่งของรัสเซียและวิธีการสัดส่วน นักวิทยาศาสตร์บางคนไม่ค่อยได้ใช้วิธีวัดความเข้มข้นสัมบูรณ์ แต่นักวิทยาศาสตร์ชาวอังกฤษใช้แรงงานเข้มข้นกว่า

วิธีนี้คล้ายกับวิธีความเข้มข้นสัมบูรณ์มาก การเตรียมหลอดทดลองด้วย ยาสั่นแบบนั้น เช่นเดียวกับวิธีความเข้มข้นสัมบูรณ์ อย่างไรก็ตาม ปริมาณเมล็ดของสารแขวนลอยของเชื้อมัยโคแบคทีเรียม วัณโรค ลดลง 10 เท่า สิ่งนี้จะช่วยลดความถี่ของการดื้อต่อโดยธรรมชาติของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis บางสายพันธุ์ต่อยาเช่น Ethambutol, proteonamid, capreomycin ในภาชนะควบคุมจะมีหลอดทดลอง 2 หรือ 3 หลอดที่มีปริมาณการเพาะซึ่งเท่ากับในหลอดทดลอง โดยเจือจางต่อเนื่อง 10 และ 100 ครั้ง เกณฑ์สำหรับการดื้อยาคือส่วนหนึ่งของการเจริญเติบโตของเชื้อวัณโรคที่ติดตามด้วยสายตา สำหรับการเตรียมการของแถวที่ 1 เกณฑ์เพื่อความมั่นคงคือเพิ่มขึ้น 1% ในจำนวนผลผลิตสำหรับการเตรียมการของแถวที่ 2 - เพิ่มขึ้น 1 หรือมากกว่า 10% ของซังในการจัดเก็บที่ความเข้มข้นวิกฤติที่เลือก tsii .

คุณ 1997 ร กลุ่มงาน WHO และ International Antituberculosis Union เนื่องจากการค้นพบการดื้อยาต้านวัณโรคได้ทำการปรับเปลี่ยนเกณฑ์เหล่านี้โดยคำนึงถึงเชื้อมัยโคแบคทีเรียถาวรที่เติบโตบนดิน ความเข้มข้นของ Levenshtein-Jensen เฉลี่ยที่ความเข้มข้นเริ่มต้น:

• ไดไฮโดรสเตรปโตมัยซิน - 4 ไมโครกรัม/มล.;
• ไอโซไนอาไซด์ - 0.2 ไมโครกรัม/มล.:
• ไรแฟมพิซิน - 40 ไมโครกรัม/มล.:
• เอแทมบูทอล - 2 ไมโครกรัม/มล.

ในปี 2544 มีการกำหนดความเข้มข้นวิกฤตสำหรับยาเสพติดที่น่ารังเกียจในแถวที่ 2 (สำหรับสัดส่วนวิกฤต 1%):

• คาพรีมัยซิน - 40 ไมโครกรัม / มล.;
• โปรไทโอนาไมด์ - 40 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร;
• กานามัยซิน - 30 ไมโครกรัม/มล.;
• ไวโอมัยซิน - 30 ไมโครกรัม / มล.;
• ไซโคลซีรีน - 40 ไมโครกรัม / มล.;
• กรดอะมิโนซาลิไซลิก - 0.5 ไมโครกรัม / มล.;
• ofloxacin - 2 ไมโครกรัม/มล.

ผลลัพธ์ของการเจริญเติบโตจะถูกประเมินหลังจากการเพาะปลูกเป็นเวลา 4 ปีเป็นผลผลิตระยะแรก และหลังจากการเพาะปลูกเป็นเวลา 6 ปีเป็นผลผลิตที่เหลือ

เพื่อประเมินความไวของยาต่อไพราซินาไมด์ ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในเคมีบำบัดสำหรับวัณโรคในปัจจุบัน แนะนำว่าความเข้มข้นวิกฤตอยู่ที่ 200 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร อย่างไรก็ตาม ยังไม่มีวิธีการทั่วไปในการพิจารณาการดื้อยาของยานี้บนอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของแข็ง เนื่องจากฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียจะปรากฏเฉพาะในตัวกลางที่เป็นกรด (pH

เพื่อประเมินความแข็งแกร่งของผลลัพธ์ของความไวยาของมัยโคแบคทีเรีย ขอแนะนำให้ทดสอบผลิตภัณฑ์ Lowenstein-Jensen ชุดใหม่ควบคู่ไปกับความไวของสายพันธุ์มาตรฐานในพิพิธภัณฑ์ H37Rv นอกจากนี้ยังมีเกณฑ์ทางจุลชีววิทยาที่สำคัญที่ต้องปฏิบัติตามเพื่อให้วิธีการทำงานได้ดีและผลลัพธ์ที่จะตีความได้อย่างถูกต้อง สิ่งเหล่านี้รวมถึงความมีชีวิตของการเพาะเลี้ยงเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค กฎสำหรับการแยกสารแขวนลอยและสารแขวนลอยที่เป็นเนื้อเดียวกัน กฎสำหรับการเลือกวัฒนธรรมของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค ความเป็นตัวแทนของมวลแบคทีเรียที่เลือก ความน่าเชื่อถือของการดื้อยาที่ระบุจะลดลงเมื่อมีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียต่ำมาก

วิธีการประเมินความไวทางการแพทย์ที่เหลืออยู่ซึ่งมีแนวโน้มดีด้วยความช่วยเหลือของระบบอัตโนมัติ เราจะดำเนินการในส่วนนี้อย่างละเอียดถี่ถ้วนที่สุดในการพัฒนาโดยใช้ VASTES MGIT-960 ในกรณีนี้ความไวของยาของเชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรคจะพิจารณาจากวิธีการสัดส่วนที่ปรับเปลี่ยน กระบวนการนี้ทำให้มั่นใจได้ว่าการเจริญเติบโตของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคจะมีความเท่าเทียมกันในตัวอย่างควบคุมและในหลอดทดลองที่มีการเตรียมยา เพื่อเพิ่มความไวต่อสเตรปโตมัยซิน ไอโซไนอาซิด ริฟอฟ-พิซิน และเอแทมบูทอล อาหารเสริมที่มีฤทธิ์ต้านการอักเสบและยาปฏิชีวนะจะรวมอยู่ในชุด SIRE หากต้องการทดสอบความไวต่อยาไพราซินาไมด์ ให้ใช้ชุด PZA ในระหว่างการทดสอบ หลอดทดลองที่มียารักษาโรคจะถูกฉีดด้วยสารแขวนลอยของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค เช่นเดียวกับหลอดควบคุมที่มีสารแขวนลอยเจือจาง 100 เท่าสำหรับยาทั้งหมด ด้วยการเติม pyrazinamide ทำให้เจือจางสารแขวนลอย 10 ครั้ง เกณฑ์สำหรับการต้านทานเป็นตัวบ่งชี้การเติบโตของมัยโคแบคทีเรียที่ 100 GU โดยมีการเติบโตสำเร็จในตัวอย่างควบคุมที่ 400 GU (หัวข้อ "วิธีการทางวัฒนธรรมในการตรวจหามัยโคแบคทีเรีย") รูปแบบและการตีความผลลัพธ์จะดำเนินการโดยอัตโนมัติและสามารถป้อนลงในโปรแกรมที่เลือกได้

เนื่องจากความเข้มข้นวิกฤต ความเข้มข้นสุดท้ายในหลอดทดลองที่มีสิ่งมีชีวิตหายากจะถูกกำหนด ในเวลานี้ ความเข้มข้นวิกฤตจะถูกแบ่งออกเป็นทั้งยาของแถวที่ 1 และของแถวที่ 2 จำเป็นต้องทราบว่าความไวของเชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรคต่อไซโคลซีรีนและกรดอะมิโนซาลิไซลิกนั้นวัดในแกนไข่ที่มีชีวิต

โปรโตคอลหุ่นยนต์โดยละเอียดตามคำอธิบายของระบบช่วยให้สามารถตรวจสอบความไวของยาได้ทั้งในการเพาะเลี้ยง (ที่มี PS ขนาดใหญ่) และในบริเวณใกล้เคียงกับการเติบโตขั้นต้นของมัยโคแบคทีเรียในตัวอย่าง MGIT ตัวเลือกที่เหลือจะช่วยเร่งเวลาในการดำเนินการศึกษาวัฒนธรรมทำให้คุณได้รับผลลัพธ์ใหม่เกี่ยวกับการเพาะเชื้อ Mycobacterium tuberculosis (รวมถึงข้อมูลเกี่ยวกับความไวของยา) ภายใน 3 วันนับจากการรวบรวมวัสดุอย่างไรก็ตามเช่นเดียวกับแบบดั้งเดิม วิธีสามารถดำเนินการได้ถึงเดือนที่ 3 เท่านั้น ผลลัพธ์ทันทีหากผู้ป่วยอยู่ในระยะการรักษาเข้มข้นสามารถชดเชยการติดตามผลในระยะยาวได้

การแยกความแตกต่างของมัยโคแบคทีเรีย

เห็นได้ชัดว่าสื่อตลอดชีวิตที่ถูกเลือกนั้นไม่ได้คัดเลือกอย่างเข้มงวด การแยกความแตกต่างเพิ่มเติมของเชื้อมัยโคแบคทีเรียนั้นได้รับการยอมรับโดยภาคบังคับ ความจำเป็นในการแยกแยะความแตกต่างของมัยโคแบคทีเรียนั้นเกิดจากคุณสมบัติหลายประการของกระบวนการทางพยาธิวิทยาที่เกิดจากตัวแทนของสกุล: การย้ายถิ่นที่หลากหลายและผลของวัณโรคและมัยโคแบคทีเรียการมีอยู่ของการดื้อยาตามธรรมชาติต่อยาต้านวัณโรคที่ใช้งานอยู่

เป็นที่ทราบกันดีว่าการระบุเบื้องต้นของเชื้อมัยโคแบคทีเรียต่อเชื้อ M. tuberculosis complex จากเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่ไม่ใช่วัณโรคนั้นขึ้นอยู่กับลักษณะดังต่อไปนี้: ความลื่นไหลของการเจริญเติบโตบนตัวกลางมีชีวิตขนาดใหญ่ การสร้างเม็ดสี สัณฐานวิทยาของโคโลนี หลักฐานความต้านทานต่อกรดและอุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโต .

น่าเสียดายที่ไม่มีวิธีการทางห้องปฏิบัติการวิธีเดียวที่สามารถแยกเชื้อวัณโรคที่เกิดจากเชื้อมัยโคแบคทีเรียเชิงซ้อนจากเชื้อมัยโคแบคทีเรียชนิดรวดเร็วเป็นกรดอื่นๆ ได้อย่างน่าเชื่อถือ หลังจากรวมสัญญาณที่อธิบายไว้เข้ากับผลลัพธ์ของการค้นพบจำนวนหนึ่งด้านล่าง การทดสอบทางชีวเคมีทำให้สามารถระบุเชื้อเชื้อวัณโรคที่เกิดจากเชื้อมัยโคแบคทีเรียเชิงซ้อนได้ ให้ความมั่นใจสูงถึง 95%

สำหรับการแยกความแตกต่างของเชื้อมัยโคแบคทีเรียเชิงซ้อน M. tuberculosis (M. tuberculosis, M. bovis, M. bovisBCG, M. africanum, M. microti, M. canettii และอื่นๆ) จากเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่ไม่ใช่วัณโรคที่เติบโตเพิ่มมากขึ้น ซึ่งเป็นสารชีวภาพหลัก ดังต่อไปนี้ การทดสอบเผยให้เห็นสัญญาณต่อไปนี้:

• ข้อมูลจำเพาะสำหรับการผลิตกรดนิโคตินิก (การทดสอบไนอาซิน):
• กิจกรรมไนเตรตรีดักเตส
• คาตาเลสที่ทนความร้อนได้
• การเจริญเติบโตบนอาหารที่มีกรดโซเดียมซาลิไซลิก (1 มก./มล.)

นอกจากนี้คุณยังสามารถทดสอบการเจริญเติบโตในช่วงกลางได้ด้วยการเติมกรดพาราไนโตรเบนโซอิก 500 mcg/ml หรือโซเดียมคลอไรด์ 5%

ห้องปฏิบัติการแบคทีเรียวิทยาส่วนใหญ่จะระบุจุลินทรีย์และจุลินทรีย์ซึ่งพิจารณาจากความสามารถร่วมกันของห้องปฏิบัติการและความสามารถด้านระเบียบวิธีของแพทย์

ในกรณีส่วนใหญ่ ในทางปฏิบัติ สำหรับการแยกความแตกต่างของ M. tuberculosis และ M. bovis เป็นไปได้ที่จะอาศัยการทดสอบต่อไปนี้: ไม่ใช่อะซิน สำหรับการตรวจหาไนเตรตรีดักเตส สำหรับการตรวจหาปรสิตและการลงทะเบียนของ In ตรงกลาง เติมไทโอฟีน-2-คาร์บอกซิลิกแอซิดไฮดราไซด์ 2 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ในกรณีนี้เชื่อกันว่าเชื้อมัยโคแบคทีเรียมคอมเพล็กซ์ วัณโรค มีลักษณะการโจมตีของสัญญาณ:

• การเติบโตขนาดใหญ่ (มากกว่า 3 ปี)
• อุณหภูมิการเจริญเติบโตอยู่ระหว่าง 35-37 o C;
• การปรากฏตัวของการสร้างเม็ดสี (สีงาช้าง);
• เปลือกทนกรดหมัก
• การทดสอบนิโคตินเชิงบวก
• การทดสอบไนเตรตรีดักเตสเชิงบวก
• การมีอยู่ของคาตาเลสที่ทนความร้อนได้ (68 o C)
• มีการเติบโตอย่างมากตรงกลางของLöwenstein-Jensen ซึ่งหมายความว่า:
  • กรดโซเดียมซาลิไซลิก 1,000 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร
  • กรดพาราไนโตรเบนโซอิก 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร
  • โซเดียมคลอไรด์ 5%:
• สำหรับผู้ใหญ่ที่มีกรดไทโอฟีน-2-คาร์บอกซิลิก 1-5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร

ความเกี่ยวข้องของการแยกความแตกต่างระหว่างเชื้อมัยโคแบคทีเรียจะเพิ่มขึ้นตามอุบัติการณ์ของการติดเชื้อ HIV/AIDS ที่เกี่ยวข้องกับวัณโรคหรือเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่เพิ่มขึ้น ในขณะนี้ ห้องปฏิบัติการระดับภูมิภาคในทางปฏิบัติยังไม่มีความพร้อมที่แน่นอนในการดำเนินงานนี้อย่างถูกต้อง

การวินิจฉัยทางภูมิคุ้มกันของวัณโรค

มีปรากฏการณ์สากล ยา และการทดสอบทางภูมิคุ้มกันจำนวนหนึ่งที่ตรวจพบครั้งแรกในวัณโรคหรือในรูปแบบของภูมิคุ้มกันในเชื้อมัยโคแบคทีเรีย รวมถึง BCG และ tuberculin เช่นปรากฏการณ์การบำบัดด้วยฮอร์โมนทดแทนผิวหนัง (การทดสอบ tuberculin - ปฏิกิริยา Pirquet และ Mantoux) ปฏิกิริยาต่อการฉีด tuberculin ทางผิวหนังไปยังสัตว์ที่ไวต่อความรู้สึก (ปรากฏการณ์ Koch) ตรวจพบแอนติบอดีตัวแรกในโรคติดเชื้อในวัณโรคด้วย เป็นที่เข้าใจกันว่ายิ่งกลไกของภูมิคุ้มกันต่อต้านวัณโรคและการควบคุมทางพันธุกรรมลึกซึ้งยิ่งขึ้นเท่าใดก็ยิ่งใช้วิธีการทางภูมิคุ้มกันและยาที่มีอิทธิพลต่อระบบภูมิคุ้มกันในวงกว้างขึ้นเพื่อแก้ปัญหาในทางปฏิบัติ phthisiatrics

ปัญหาในทางปฏิบัติที่สำคัญและยากที่สุดในเวลานี้คือการตรวจหาวัณโรคในกระบวนการคัดกรองประชากรจำนวนมาก อย่างไรก็ตามโดยไม่คำนึงถึงข้อมูลตัวเลขเกี่ยวกับ "ความสำเร็จ" (ในเอกสารที่อยู่ติดกัน) ไม่มีหลักฐานสำหรับวัตถุประสงค์เหล่านี้ของวิธีภูมิคุ้มกันวิทยา (สร้างขึ้นใน "มือขวา") และยา

วิธีการทางภูมิคุ้มกันวิทยา รวมถึงการทดสอบทางซีรั่มวิทยา (การระบุแอนติเจน แอนติบอดี) และการทดสอบความท้าทายของวัณโรค มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในทางคลินิก

อันดับแรกในการตรวจสอบทางภูมิคุ้มกันวิทยาซึ่งจำเป็นสำหรับการวินิจฉัยแยกโรคนั้นมีวิธีการทางเซรุ่มวิทยา ได้แก่ การระบุแอนติเจนและแอนติบอดีในส่วนต่างๆ ของร่างกาย

ความจำเพาะของแอนติบอดีที่ระบุต่อเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคนั้นอยู่เบื้องหลังการตรวจวิเคราะห์โดยอิมมูโนแอสเสย์ของแอนติเจน มีการกำหนดจำนวนแอนติเจนซึ่งใหญ่ที่สุดคือ tuberculin PPD:

• PPD และการเตรียมการที่ซับซ้อนอื่น ๆ จากแหล่งวัฒนธรรม
• อัลตราโซนิกสลายตัว;
• สารสกัดไตรตันและการเตรียมผนังเซลล์ที่ซับซ้อนอื่น ๆ
• 5 แอนติเจน (แดเนียล);
• 60-แอนติเจน (ค็อกซิโต);
• ไลโปอาราบิโนมานแนน;
• ปัจจัยสาย (trehalose-6,6-di-mycolate);
• ฟีนอลและไกลคอลลิพิดอื่น ๆ
• ไลโปโพลีแซ็กคาไรด์;
• แอนติเจนที่มีผลผูกพันกับไฟโบรเนคติน
• โปรตีน (ส่วนใหญ่มักรีคอมบิแนนท์); 81,65,38,34,30,19,18,16,15.12 KDA เข้า

จากการวิจัยอย่างกว้างขวางในรัสเซียและต่างประเทศ ได้มีการระบุรูปแบบหลักของการสร้างแอนติบอดีและประสิทธิผลของการวินิจฉัยทางเซรุ่มวิทยาของวัณโรค: ยิ่งแอนติเจนที่ซับซ้อนมีขนาดใหญ่เท่าใด ความไวก็จะยิ่งมากขึ้นเท่านั้น และยิ่งไม่มีการทดสอบความจำเพาะต่ำลง ความเฉพาะเจาะจงใน ในประเทศต่างๆเพื่อเปลี่ยนแปลงความชุกของการติดเชื้อในประชากรที่มีเชื้อวัณโรคและเชื้อมัยโคแบคทีเรียที่ไม่ใช่วัณโรค หลังการฉีดวัคซีน BCG เป็นต้น ในเด็กเนื้อหาข้อมูลของการวินิจฉัยโรคซีโรไดอะโนซิสจะต่ำกว่าในผู้ใหญ่ ในวัณโรคปฐมภูมิ (โดยปกติคือเด็ก) IgM จะให้ข้อมูลมากกว่า ในระดับรอง - IgG ในผู้ป่วยที่ติดเชื้อ HIV ค่าข้อมูลของ serodiagnosis ที่มีแอนติบอดีที่ตรวจพบจะลดลง ประสิทธิผลของแอนติบอดีที่กำหนดนั้นอยู่ใน "ช่วงเวลาทางคลินิก" จำนวนหนึ่ง: กิจกรรมของกระบวนการ (การปรากฏหรือการมีอยู่ของ "การมองเห็น" ของมัยโคแบคทีเรีย, หลักฐานของการสลายตัวที่ว่างเปล่า, ขั้นตอนการแทรกซึม), ความกว้างของกระบวนการ เรื่องเล็กน้อยของการเปลี่ยนแปลงของฉัน

ความไวของวิธี Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) มีค่าเกือบ 70% การขาดประสิทธิผลของการสืบสวนมีสาเหตุมาจากความจำเพาะต่ำ ก่อนหน้านี้ ได้มีการพิจารณาถึงความเป็นไปได้ของการตรวจคัดกรองทางเซรุ่มวิทยาในกลุ่มที่มีความเสี่ยงสูง รวมถึงผู้ที่มีการเปลี่ยนแปลงที่ขาภายหลังวัณโรค

หากต้องการเพิ่มความจำเพาะของ ELISA ให้ค้นหาแอนติเจนที่จำเพาะมากขึ้น รวมถึงแอนติเจนที่มีวิธีการทางพันธุวิศวกรรม: ESAT-6 และอื่นๆ (ดิวิเช่). การปรากฏตัวของแอนติเจนที่จำเพาะอย่างเคร่งครัด (38 kDa, ESAT) ส่งเสริมความจำเพาะ สิ่งนี้ยังเปลี่ยนแปลงความไวของการวิเคราะห์อย่างมีนัยสำคัญอีกด้วย ลำดับของ ELISA (ระบบทดสอบในห้องปฏิบัติการทดลอง ตัวอย่างเช่น ชุด Pathozyme ELISA) ยังรวมถึงชุดอิมมูโนโครมาโตกราฟีที่มีการกรองด้านข้าง (Mycodot) รวมถึงการทดสอบอื่นๆ ที่คล้ายกัน (การทดสอบแบบจุดบนเมมเบรน) ด้วยภาพ I ประเมินผลลัพธ์ของการตรวจสอบ เมื่อทำการทดสอบเหล่านี้ ควรทำการวิเคราะห์เป็นเวลา 10-30 นาที พวกเขาไม่ต้องการความสนใจเป็นพิเศษ แต่ต้องการการประเมินผลลัพธ์ด้วยภาพซึ่งสัมพันธ์กับอัตวิสัยที่ทราบ วิธีการที่ระบุมีลักษณะเฉพาะของความไวและความจำเพาะประมาณเดียวกัน (สอดคล้องกัน 70% และ 90-93%) เหมือนกับ ELISA แบบดั้งเดิม

การใช้วิธีอิมมูโนแอสเสย์มีความสำคัญเป็นพิเศษในบริบทของข้อมูลเพิ่มเติม ซึ่งรวมอยู่ในวิธีการต่างๆ ที่ซับซ้อนในการวินิจฉัยแยกโรควัณโรค โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการวินิจฉัยรูปแบบหลังกฎหมาย วิธี ELISA มีประสิทธิภาพสูงสุดในการวินิจฉัยวัณโรคเยื่อหุ้มสมองอักเสบเมื่อมีการระบุไขสันหลัง ในกรณีนี้ ความไวของการวิเคราะห์จะกลายเป็น 80-85% และความจำเพาะคือ 97-98% ข้อมูลเกี่ยวกับประสิทธิผลของแอนติบอดีต่อเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคในเยื่อเมือกในการวินิจฉัยโรคเยื่อหุ้มปอดอักเสบจากวัณโรค

การเหนี่ยวนำการสังเคราะห์แกมมา-อินเตอร์เฟอรอน ในหลอดทดลอง

อินเตอร์เฟอรอน แกมมา (IFN-γ) เป็นปัจจัยการป้องกันภูมิคุ้มกันจำเพาะที่ถูกนำมาใช้เพื่อกระตุ้นระบบเอนไซม์ของแมคโครฟาจเพิ่มเติม การเหนี่ยวนำการสังเคราะห์ IFN-γ โดย T-lymphocytes ที่ไวแสงเป็นผลมาจากอันตรกิริยากับแอนติเจนของมัยโคแบคทีเรีย

เช่นเดียวกับแอนติเจน vicoristics ก็เหมือนกับ tuberculin PPD เช่นเดียวกับแอนติเจนจำเพาะที่ถูกกำจัดโดยพันธุวิศวกรรม แอนติเจนของโซครีม ESAT-6 (แอนติเจนที่หลั่งเร็วที่มีน้ำหนักโมเลกุล 6 kDa) และ CFP-10 (โปรตีนกรองวัฒนธรรม 10 kDa) พันธุวิศวกรรมหรือแอนติเจนชนิดรีคอมบิแนนท์มีอยู่ในเซลล์ของวัคซีนบีซีจีและมัยโคแบคทีเรียอื่นๆ ในกรณีที่ขาดวัณโรค สามารถเปรียบเทียบผลการทดสอบการเหนี่ยวนำ IFN-γ กับผลการทดสอบวัณโรคผิวหนังได้ (ความสัมพันธ์โดยตรง) เมื่อใช้แอนติเจนดัดแปลงพันธุกรรมที่แตกต่างกัน ผลการทดสอบจะมีความเฉพาะเจาะจงมากขึ้น และไม่ขึ้นอยู่กับการฉีดวัคซีนบีซีจีครั้งก่อน เมื่อผู้ที่ได้รับการฉีดวัคซีนไม่ได้สัมผัสกับการติดเชื้อวัณโรค ความจำเพาะของการทดสอบคือ 99% ความไวต่อการทดสอบในผู้ป่วยวัณโรคอยู่ระหว่าง 81 ถึง 89%

การทดสอบและการวินิจฉัยได้รับการพัฒนาโดยอาศัยเซลล์เม็ดเลือดครบส่วนเพาะเลี้ยงในระยะสั้นหรือเซลล์โมโนนิวเคลียร์ที่เห็นจากเลือด โดยมีแอนติเจนของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis ในหลอดทดลอง โดยมีความเข้มข้นเริ่มต้นของ IFN- γ หรือจำนวน T-lymphocytes ที่ลดลง ซึ่งสังเคราะห์ IFN-γ ความเข้มข้นของอินเตอร์เฟอรอนที่สังเคราะห์ในตัวอย่างทดสอบถูกกำหนดโดย ELISA โดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีตัวแทนที่จับ IFN-γ จากนั้น สำหรับการสอบเทียบเพิ่มเติมของ IFN-γ มาตรฐาน จะพิจารณาความเข้มข้นในตัวอย่างหรือหลุมของเพลต

ในการทดสอบเอลิสปอต จำนวนทีเซลล์ที่สังเคราะห์ IFN-γ ถูกเปิดเผย แห้งบนพื้นผิวของจานที่เคลือบด้วยแอนติบอดีต่อ IFN-γ

ผู้พัฒนาการทดสอบวินิจฉัยโดยใช้ IFN-γ induction ในหลอดทดลอง ซึ่งได้รับการอนุมัติจากสำนักงานยาและผลิตภัณฑ์แห่งสหรัฐอเมริกา ยืนยันว่าเป็นไปไม่ได้ที่จะแยกความแตกต่างของการติดเชื้อวัณโรคที่แฝงเร้นจาก วัณโรคที่ใช้งานอยู่. ดังนั้นในภูมิภาคที่มีการติดเชื้อในระดับสูง การทดสอบจึงไม่มีค่าวินิจฉัยโดยตรง อย่างไรก็ตาม ในภูมิภาคของเรา สามารถใช้แยกแยะการติดเชื้อวัณโรคในเด็กจากอาการแพ้หลังการฉีดวัคซีนได้ รวมทั้งประเมินระดับภูมิคุ้มกันจำเพาะในระหว่างการรักษา

ขณะนี้ ระบบทดสอบกำลังได้รับการทดสอบสำหรับการเหนี่ยวนำที่สำคัญของการสังเคราะห์ IFN-γ โดยแอนติเจนของวัณโรค ในหลอดทดลอง ที่จำเพาะ

สถานะภูมิคุ้มกันและการลุกลามของวัณโรค การแก้ไขภูมิคุ้มกัน

ในกระบวนการรักษาวัณโรค ผู้คนจะพบกับการเปลี่ยนแปลงของแอนติเจนในเลือดและระบบภูมิคุ้มกัน

ข้อมูลเกี่ยวกับการเปลี่ยนแปลงของสารหลั่งและแฟบริคมีความสำคัญและแม่นยำอย่างยิ่ง สิ่งเดียวที่สามารถนำมาพิจารณาได้คือตามกฎแล้วในวัณโรคแกรนูโลมามี T-lymphocytes ที่เปิดใช้งานจำนวนมาก

ให้เรามุ่งเน้นไปที่สองประเด็นที่จำเป็นในการทำความเข้าใจบทบาทของกลไกภูมิคุ้มกันในการรักษาวัณโรคในมนุษย์:

• ในคนไข้ที่เป็นโรค SNID มีความถี่ในการพัฒนาการดื้อยาหลายชนิดสูงเป็นพิเศษ
• ด้วยการดื้อยาหลายชนิด (และในระหว่างที่มีการติดเชื้อ HIV) ระบบภูมิคุ้มกันจะถูกทำลาย (โดยเฉพาะอย่างยิ่งแผ่นทีเซลล์) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง

ในกรณีของวัณโรคมีการใช้วิธีการแก้ไขภูมิคุ้มกันหลายวิธี: ประการแรกยาที่ทำหน้าที่หลักในภูมิคุ้มกันของ T-cell และระบบของ phagocytes โมโนนิวเคลียร์ (ฮอร์โมน thymic, isophone, lycopid, polyoxidonium ฯลฯ ) เช่นเดียวกับเชื้อมัยโคแบคทีเรียทั้งหมด (ลดทอน) และส่วนประกอบต่างๆ

การวินิจฉัยทางอณูชีววิทยาของวัณโรค

วิธีการทางอณูชีววิทยาในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อนั้นส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับการจัดการของวัสดุจีโนมของเชื้อแบคทีเรียและไวรัสด้วยวิธีการระบุวัสดุทางจริยธรรมของยีนที่เฉพาะเจาะจง - ชิ้นส่วน DNA ที่มีลำดับนิวคลีโอไทด์ที่จำเพาะต่อสายพันธุ์หรือสายพันธุ์เฉพาะของ ด้วงสำหรับการวิเคราะห์ลำดับเฉพาะ DNA ในยีนที่บ่งบอกถึงความไวของระบบเตือนภัยต่อการร้องเพลงสุนทรพจน์ทางการแพทย์ตลอดจนการวิเคราะห์กิจกรรมการทำงานของยีนการร้องเพลงของระบบเตือนภัย วิธีทางอณูชีววิทยาทำให้เกิดการขยายตัวอย่างมากในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์และการประยุกต์ในทางปฏิบัติในการวินิจฉัยและควบคุมการติดเชื้อแบคทีเรียและไวรัสต่างๆ หลังจากการค้นพบปฏิกิริยาโพลีเมอเรส Lanzug ของ Kerry Mullis (ผู้ได้รับรางวัลโนเบล Evskogo ปี 1989) ในปี 1989

หลักการและความเป็นไปได้ของวิธีปฏิกิริยาโพลีเมอเรส Lanczyg

PLR ช่วยให้คุณสามารถขยาย (ทวีคูณ) ในตัวอย่างลำดับนิวคลีโอไทด์ (ชิ้นส่วน DNA ของร่างกาย) ในระยะเวลาหลายปีเป็นล้านครั้ง การทำปฏิกิริยาเมื่อมีสาย DNA เส้นเดียวหมายถึงความไวในการวิเคราะห์สูง

ลำดับนิวคลีโอไทด์ของแปลงเพลงใน Lancus DNA บ่งบอกถึงความจำเพาะทางพันธุกรรมของจุลินทรีย์ ซึ่งอธิบายความจำเพาะสูงของ PLR

วิธีการที่สำคัญในการระบุและตรวจสอบลักษณะของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis นั้นขึ้นอยู่กับลักษณะทางชีวภาพของจุลินทรีย์ซึ่งพบได้ทั่วไปในคนส่วนใหญ่ นั่นคือ การทดแทน DNA ของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis ในกรณีของ x ที่ปลูกเป็นเวลา 12-24 ปี

หลักการของวิธี PLR อยู่ที่การขยายสัญญาณ - หลายครั้งหลายล้านครั้ง ลำดับดีเอ็นเอเฉพาะหลายแปลงในปริมาตรไมโครของหลอดทดลองที่มีการวนซ้ำของปฏิกิริยาสามขั้นตอน ซึ่งเกิดขึ้นในสภาวะอุณหภูมิที่แตกต่างกัน:

• ด่านที่ 1 - การสูญเสียสภาพของ DNA ที่มีเกลียวคู่เมื่อถูกความร้อนจากการแยกแลนซิน
• ด่าน II - การรวมตัวเสริม (การผสมพันธุ์) ของไพรเมอร์ (โอลิโกนิวคลีโอไทด์ของเมล็ด) กับส่วนปลายของ Lancsugs ของชิ้นส่วน DNA เฉพาะเจาะจงที่เลือกไว้สำหรับการคูณ
• Stage III - การผลิตชิ้นส่วน DNA ด้วยความช่วยเหลือของ DNA polymerase ที่ทนความร้อนได้

สำหรับการขยายตัวอย่างจะมีเทมเพลตโมเลกุล DNA มีดีออกซีนิวคลีโอไซด์ไตรฟอสเฟต (นิวคลีโอไทด์) หลายประเภทที่มาแทนที่ฐานไนโตรเจนบางชนิด: อะดีนีน (A), ไทมีน (T), กัวนีน (G), ไซโตซีน (C); โอลิโกนิวคลีโอไทด์ของเมล็ดสังเคราะห์แยกกัน (ไพรเมอร์) ซึ่งประกอบด้วยคู่เบส 18-20 คู่ เอนไซม์ DNA polymerase ที่ทนความร้อนได้ซึ่งมีอุณหภูมิที่เหมาะสมที่สุดคือ 68-72 ° C และไอออนแมกนีเซียม

ความจำเพาะของ PLR อยู่ที่การเลือกชิ้นส่วน DNA เป็นไปได้ที่จะสังเคราะห์โอลิโกนิวคลีโอไทด์ไพรเมอร์ขนาบข้างก่อน ความจำเพาะของการผสมพันธุ์และการผลิต DNA ขึ้นอยู่กับหลักการเสริมของคู่ของฐานไนโตรเจน: อะดีนีน-ไทมีน, กัวนีน-ไซโตซีน

เพื่อกำหนดจีโนมของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis ที่ซับซ้อนให้กับการขยายเป้าหมายที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดในระบบการทดสอบส่วนใหญ่ ชิ้นส่วน DNA IS6110 ซึ่งมีอยู่ในสายพันธุ์ส่วนใหญ่ของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis จะรวมอยู่ในจีโนมและมีการทำซ้ำในจำนวนที่มีนัยสำคัญ (10-20) ซึ่งจะทำให้มั่นใจว่าการวิเคราะห์มีความไวสูงตามลำดับความจำเพาะ ในเวลาเดียวกัน มีการอธิบายสายพันธุ์ของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคที่มีการทำซ้ำจำนวนเล็กน้อยหรือการมีอยู่ของชิ้นส่วน IS6110

การมองเห็นโมเลกุล DNA จากตัวอย่างทางชีววิทยา

สำหรับ ดำเนินการ PLRโมเลกุล DNA ของผู้กระทำความผิดนั้นมองเห็นได้จากวัสดุทางชีวภาพด้วยวิธีเพียงเล็กน้อย โดยมี DNA ที่ไม่จำเพาะเจาะจงจำนวนน้อยที่สุดและสารยับยั้งเอนไซม์ต่างๆ - DNA polymerase

การเตรียมตัวอย่างจะต้องดำเนินการในสมอง ซึ่งหลีกเลี่ยงการก่อตัวของการปนเปื้อนข้ามของรูปแบบที่ติดตาม ซึ่งมองเห็นได้เป็นโมเลกุล DNA เพื่อจุดประสงค์นี้ จำเป็นต้องรักษาพื้นผิวโต๊ะและเครื่องใช้ไฟฟ้าด้วยสารเคมีที่มีคลอรีนก่อน นอกจากนี้ จำเป็นต้องถอดถุงมือที่สะอาด ท่อแบบใช้แล้วทิ้ง และทิปออกจากปิเปตอัตโนมัติด้วย

หากต้องการดู DNA ของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคจากสิ่งส่งตรวจทางคลินิก (น้ำไขสันหลัง เนื้อเยื่อหลอดลม) เพื่อไม่ให้เม็ดเลือดขาว เศษซากเซลล์ หรือเกลือออกจำนวนมาก ให้ปั่นแยกตัวอย่างที่ 3-4 ต้น พลิกกลับลงในฮวิลินา เติมสารละลายไตรตัน X-100 2% 20-30 µl และให้ความร้อนที่ 90 o เป็นเวลา 30 นาที

ในการเตรียมตัวอย่าง จำเป็นต้องมีเสมหะ ลดที่มีประสิทธิภาพเพื่อจุดประสงค์นี้ ให้ใช้โซเดียมไฮดรอกไซด์ 4% และ N-acetyl-L-cysteine ​​​​(NALC) ในขนาด 50-80 มก. ต่อตัวอย่าง - ขึ้นอยู่กับความหนืดของแก้ว การใช้ NALC จำเป็นต้องมีการเตรียมชั่วคราว หรือสามารถเติมผง NALC แบบแห้งลงในตัวอย่างได้โดยตรง หลังจากทำให้บริสุทธิ์แล้วจำเป็นต้องปั่นแยกตัวอย่างด้วยความยาว 15 นาทีที่ 3.5-4 พัน เปลี่ยนเป็นสควอช (3000 กรัม) ในหลอดทดลองที่มีฝาปิดขนาด 50 มล. ในการซักแบบเดียวกับที่แนะนำสำหรับการเตรียมเสมหะก่อนหยอดเมล็ด

สำหรับการสกัด DNA จากการล้อม วิธีการที่ใช้กันมากที่สุดคือการใช้สารละลาย guanidine isothiocyanate ขนาด 5-6 โมลาร์เป็นสารทำปฏิกิริยา lysing และอนุภาคที่มีรูพรุนขนาดเล็กของซิลิคอนออกไซด์ (“ดินเบา”) เพื่อดูดซับโมเลกุล DNA . สารประกอบที่ไม่เฉพาะเจาะจง รวมถึงสารยับยั้งที่เป็นไปได้ จะถูกแช่ในสารละลาย 2.5 โมลาร์ของไอโซไทโอไซยาเนตและเอธานอลของกัวนิดีน หลังจากนั้นโมเลกุล DNA จะถูกดูดซับในน้ำ ส่งผลให้เกิดการดำเนินการ PLR เพื่อให้เทคโนโลยี DNA ง่ายขึ้น "ดินเบา" มักจะถูกแทนที่ด้วยอนุภาคแม่เหล็กขนาดเล็กที่เคลือบด้วยซิลิคอนออกไซด์ หากต้องการตกตะกอนอนุภาคแทนการหมุนเหวี่ยง ให้ใช้ขาตั้งแม่เหล็กพิเศษสำหรับไมโครทิวบ์

รัสเซียได้พัฒนาวิธีการดั้งเดิมของการแยกมัยโคแบคทีเรียด้วยภูมิคุ้มกันแม่เหล็กด้วยการสกัด DNA ในภายหลัง สำหรับการแยกทางอิมมูโนแมกเนติกของเชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรค จะใช้เฟอร์โรพาร์ติเคิลขนาด 3-5 µm เคลือบด้วยซิลิคอนออกไซด์จนกว่าจะเติมเข้าไป สารยึดเกาะสารเคมีแอนติบอดีต่อโพลีโคลนอล (กระต่าย) ต่อเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค คราบเสมหะหลังจากการสลายที่เหมาะสมจะถูกทำให้เป็นกลางด้วยสารละลาย tris-HCl ที่เป็นกรดและบ่มด้วยตัวดูดซับอิมมูโนแมกเนติก จากนั้นอนุภาคอิมมูโนเฟอร์โรปจะถูกรวบรวมโดยใช้แท่งแม่เหล็กที่มีปลายที่ถอดออกได้ จากนั้นถ่ายโอนไปยังไมโครทิวบ์ และตกตะกอน เติมสารละลาย Triton X-100 2% 20-30 ไมโครลิตร และให้ความร้อนเป็นเวลา 30 นาทีที่ 90 o C นาโดซาโดวาเป็นผู้มีวิโคริสต์ใน DNA matrix สำหรับการวิเคราะห์ PLR

ปัญหาที่ยากคือการตรวจหา DNA ของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis จากตัวอย่างชิ้นเนื้อ หากต้องการแยกตัวอย่างชิ้นเนื้อ ให้ใช้เอนไซม์โปรติเนสที่ความเข้มข้นสุดท้าย 200-500 มก./ลิตร ที่อุณหภูมิ 56 o ข้ามคืน จากนั้นคุณจะเห็นวิธีใดวิธีหนึ่งที่รู้จัก ส่วนเกินของ DNA ที่ไม่เฉพาะเจาะจงในระหว่างการวิเคราะห์ PLR ของตัวอย่างชิ้นเนื้อมักทำให้เกิดปฏิกิริยายับยั้ง ซึ่งต้องมีการสกัด DNA ซ้ำ

วิธีการตรวจจับผลลัพธ์

หลังจากเสร็จสิ้นปฏิกิริยาแล้ว ชิ้นส่วน DNA ที่ถูกขยายของสิ่งมีชีวิตจะถูกระบุโดยใช้วิธีการต่างๆ

วิธีการเจลอิเล็กโตรโฟเรซิสที่ดี ในกรณีนี้ ชิ้นส่วน DNA ถูกระบุโดยกลุ่มควบคุมเชิงบวก ซึ่งถูกระบุว่าเป็นส่วน DNA เฉพาะ หรือตามขนาดที่ทราบก่อนหน้านี้ (จำนวนคู่นิวคลีโอไทด์) ของชิ้นส่วน ซึ่งได้รับการระบุนอกเหนือจากเครื่องหมายโมเลกุลมาตรฐาน

เมื่อมีบาร์เบอร์รี่จำเพาะ เอทิเดียมโบรไมด์จะรวมอยู่ใน DNA ที่มีเกลียวคู่ หลังจากการสังเคราะห์ ชิ้นส่วน DNA ดูเหมือนจะเรืองแสงภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต

ขนาดของชิ้นส่วน DNA ซึ่งถูกกำหนดโดยอิเล็กโตรโฟรีซิสตามระยะห่างจากจุดเริ่มต้นนั้นคล้ายคลึงกับเครื่องหมายโมเลกุลที่รู้จักหรือการควบคุมเชิงบวก

วิธีอื่นในการประเมินผลลัพธ์ของ PLR ขึ้นอยู่กับการผสมพันธุ์ของผลิตภัณฑ์ PLR สายโซ่เดี่ยวกับโอลิโกนิวคลีโอไทด์เสริม - โพรบ DNA ที่ติดฉลากด้วยไบโอติน พร้อมการตรวจจับเพิ่มเติมโดยใช้ปฏิกิริยาของเอนไซม์เพิ่มเติม สำหรับความช่วยเหลือเพิ่มเติม เช่น การจับกับสเตรปตะวิดิน-ลูน่า ฟอสฟาเตสคอนจูเกตกับไบโอติน

การตรวจจับประเภทนี้จะใช้เครื่องวิเคราะห์ PLR ซึ่งการตรวจจับผลลัพธ์ของ PLR จะดำเนินการโดยอัตโนมัติอันเป็นผลมาจากการอ่านความเข้มของแสงในตัวอย่างหลังจากการเกิดปฏิกิริยาของเอนไซม์

วิธีการบางวิธีอาจมีความเป็นไปได้ที่จะมีการปนเปื้อนในห้องปฏิบัติการภายในด้วยชิ้นส่วนโมเลกุล DNA ขนาดสั้น เมื่อโมเลกุลเหล่านี้ติดอยู่ในร่องรอยใหม่ จะกลายเป็นเมทริกซ์สำหรับ PLR และนำไปสู่ผลลัพธ์ที่เป็นบวกอย่างมาก

เพื่อหลีกเลี่ยงผลลัพธ์ที่เป็นบวกของ HIV จึงมีการใช้กฎการใช้และการแยกที่เข้มงวด: เพื่อดู DNA จากตัวอย่างทางชีววิทยา สถานที่สำหรับการตรวจจับผลลัพธ์ (อิเล็กโทรโฟเรซิส) ในพื้นที่ที่สะอาด พื้นที่เหล่านี้เป็นพื้นที่ที่อาจเกิดการปนเปื้อนได้ โซนแยกอีกแห่งคือพื้นที่สะอาดสำหรับเติมตัวอย่าง DNA เล็กน้อยลงในหลอดทดลองที่มีส่วนผสมของปฏิกิริยาสำหรับดำเนินการ PLR พบว่าอุปกรณ์หลัก - เครื่องขยายสัญญาณ DNA - มีหน้าที่ทำให้เกิดการปนเปื้อนในสิ่งแวดล้อม อาจเป็นในสำนักงานหรือในที่ทำงาน

เพื่อป้องกันการปนเปื้อนด้วยผลิตภัณฑ์ที่มีปฏิกิริยาขั้นสูง - amp-Licon ในระบบทดสอบ PLR ​​จะแทนที่ deoxynucleoside thymidine ด้วย deoxynucleoside thymidine ซึ่งจะถูกทดแทนในระหว่างการสังเคราะห์ Lantzug ในหลอดทดลอง ซึ่งอยู่ในตำแหน่งที่เหนือกว่า ดังนั้น thymine ฐานไนโตรเจน ซึ่งมีอยู่ใน DNA ดั้งเดิม และถูกแทนที่ด้วยยูราซิล Uracil-DNA glycosylase ซึ่งถูกเติมเข้าไปในปฏิกิริยาก่อนวัสดุที่วิเคราะห์ จะทำลายเฉพาะชิ้นส่วนที่ปนเปื้อนจากดีออกซียูริดีน แทนที่จะทำลาย DNA ดั้งเดิมที่กำลังวิเคราะห์ ทานดีออกซีไทมิดีน การให้ความร้อนเพิ่มเติมที่ 94 o C จะหยุดการทำงานของเอนไซม์นี้และไม่ส่งผลให้เกิดการขยายใน PLR

ระบบการทดสอบหลักนั้นขึ้นอยู่กับการขยายอุณหภูมิไอโซเทอร์มอลของ rRNA ซึ่งดำเนินการถอดรหัสแบบย้อนกลับและการสังเคราะห์โมเลกุล DNA є ในทางกลับกันเมทริกซ์สำหรับการสังเคราะห์โมเลกุล RNA เพิ่มเติม ตรวจพบแอมพลิคอน RNA โดยใช้โพรบ DNA ที่เตรียมอะคริดีนระหว่างการผสมพันธุ์ในหลอดปฏิกิริยา วิธีนี้นอกจากจะมีความไวสูงแล้ว ยังมีข้อได้เปรียบในการทำการวิเคราะห์ในตัวอย่างเดียว ซึ่งจะช่วยหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนได้ ตามที่ผู้เขียนระบุว่าความไวของวิธีนี้ในตัวอย่างระบบทางเดินหายใจสูงถึง 90% โดยมีความจำเพาะ 99-100%

วิธีการตรวจจับแบบใหม่ถูกนำไปใช้ใน PLR แบบเรียลไทม์ วิธีการเหล่านี้มีความโดดเด่นเป็นหลักจากการที่ PLR และการตรวจจับผลลัพธ์เกิดขึ้นพร้อมๆ กันในหลอดทดลองแบบปิดเพียงหลอดเดียว ซึ่งไม่เพียงแต่ทำให้ขั้นตอนการวิเคราะห์ง่ายขึ้นเท่านั้น แต่ยังป้องกันการปนเปื้อนของอุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการและตัวอย่างที่ติดตามผลด้วยผลิตภัณฑ์ PLR ขั้นต้นน้ำอีกด้วย

ใน PLR แบบเรียลไทม์ การตรวจจับผลลัพธ์จะขึ้นอยู่กับการเรืองแสงของฟลูออเรสเซนซ์ ซึ่งเกิดขึ้นในระหว่างการไฮบริไดเซชันของโพรบ DNA ของฟลูออโรเจนิกที่มีชิ้นส่วน DNA เฉพาะที่ถูกขยายในระหว่าง PLR โครงสร้างของโพรบ DNA ฟลูออโรเจนิกถูกกำหนดในลักษณะที่เครื่องหมายฟลูออเรสเซนต์หายไปอันเป็นผลมาจากปฏิกิริยาของเอนไซม์หรือแยกตัวออกจากโมเลกุลดับเรืองแสงในระหว่างการผสมพันธุ์เฉพาะกับโมเลกุล DNA โดยเฉพาะ ซึ่งขยายในช่วง PLR เมื่อจำนวนโมเลกุลที่ผสมกับโพรบเพิ่มขึ้น การเรืองแสงจะเพิ่มขึ้นจนถึงระดับที่ตรวจจับได้เป็นสัดส่วนกับจำนวนโมเลกุลที่ถูกขยายในผลิตภัณฑ์ ในระหว่างวงจร PLR ที่ผิวหนัง จำนวนโมเลกุลของชิ้นส่วน DNA จะเพิ่มขึ้นสองเท่า จำนวนวงจรที่การเรืองแสงปรากฏขึ้นและเพิ่มขึ้นจะเป็นสัดส่วนกับจำนวนโมเลกุล DNA ในซัง หากตัวอย่างที่มีความเข้มข้นต่างกันที่ทราบของโมเลกุลของชิ้นส่วนเปปไทด์ DNA ของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis ถูกนำเข้าไปในภาชนะสอบเทียบ จากนั้นด้วยความช่วยเหลือของโปรแกรมคอมพิวเตอร์ จีโนม DNA จำนวนมากจึงสามารถแยกวัสดุที่เป็นจิวได้

ภาพมาตรฐานของ Kozhen ของการทำซ้ำ เกณฑ์ Kolkisny - จำนวนรอบ PLR ขั้นต่ำที่จำเป็นสำหรับซังและการเติบโตถูกระบุโดยการเรืองแสง บนแกน abscis - จำนวนรอบ; ตามแนวออร์ดิเนท - ค่าเรืองแสง ความเข้มข้นของ DNA เป็นสัดส่วนกับจำนวนรอบที่จำเป็นสำหรับการเรืองแสง หน้าต่างในคอลัมน์ด้านขวา (21-32) มีหมายเลขรอบสำหรับความเข้มข้นเฉพาะ ความแปรผันระหว่างความเข้มข้น 10 เท่าของชิ้นส่วน DNA 10 2 -10 6 มล. - 3.2-3.4 รอบ สำหรับผู้ป่วยสองราย ความเข้มข้นของชิ้นส่วน IS6110 อยู่ที่ประมาณ 10 3 / มล. และ 10 4 / มล. จากจำนวนการทำซ้ำ (6-20) ของชิ้นส่วนที่วิเคราะห์ในจีโนมของเชื้อวัณโรคจากเชื้อมัยโคแบคทีเรีย จำนวนเชื้อมัยโคแบคทีเรียในตัวอย่างทางคลินิกจะอยู่ที่ประมาณ 100 และ 1,000 เซลล์

การใช้ PLR ในการวินิจฉัยวัณโรค

วิธี PLR ใช้มากที่สุดเพื่อการวินิจฉัยวัณโรคอย่างรวดเร็ว - การตรวจหาเชื้อ Mycobacterium tuberculosis ในตัวอย่างทางคลินิก: เสมหะ น้ำล้างหลอดลม สารหลั่งจากเยื่อหุ้มปอด สารคัดหลั่ง น้ำไขสันหลัง รอยแยกของกระดูกสลาย การดูดเนื้อเยื่อของผู้หญิง และตัวอย่างชิ้นเนื้อต่างๆ เมื่อตรวจพบตัวอย่างเสมหะและปัสสาวะในหลอดลมเกือบ 500 ตัวอย่างในฮอลแลนด์ จากผู้ป่วย 340 รายที่ได้รับการยืนยันว่าเป็นวัณโรค มีความไวเท่ากันของวิธี PLR การเพาะเลี้ยงก่อนการติดตาม และการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ของรอยเปื้อน ความไวของการวิเคราะห์มีความสอดคล้องกัน 92.6,88.9 และ 52.4% ดังนั้นความจำเพาะของวิธีการทั้งหมดจึงใกล้เคียงกับ 99%

ประเมินประสิทธิผลของการตรวจหาเชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรคโดยใช้กล้องจุลทรรศน์สเมียร์ การเพาะเลี้ยงโลเวนสไตน์-เจนเซน ระบบทดสอบ VASTES และการวิเคราะห์ PLR PLR แสดงให้เห็นความไว 74.4% กล้องจุลทรรศน์ - 33.8% การเพาะเลี้ยงส่วนกลางขนาดใหญ่ - 48.9% และ VASTES - 55.8% ชั่วโมงการตรวจจับโดยเฉลี่ยสำหรับการฉีดวัคซีนบนอาหารเลี้ยงเชื้อ Lowenstein-Jensen คือ 24 วัน VASTES - 13 วัน PLR - 1 วัน

ความเป็นไปได้ zastosuvannya PLRในความสามารถของผู้ที่อ่อนไหวและ วิธีการแบบสวีเดนนอกจากนี้ยังมีการหารือเกี่ยวกับการติดตามประสิทธิผลของการรักษาวัณโรคด้วย

การตรวจหา DNA ของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคด้วยวิธี PLR ด้วยเคมีบำบัดที่มีประสิทธิภาพนั้นตรวจพบได้ภายในเวลามากกว่าสามชั่วโมง - โดยเฉลี่ย 1.7 เดือนในจำนวนแบคทีเรียเท่ากันที่ตรวจพบในกล้องจุลทรรศน์ที่ไม่มีกลิ่น lumi และเป็นเวลา 2.5 มิลลิวินาทีในการเปรียบเทียบ ด้วยการตรวจทางแบคทีเรีย

การวินิจฉัยวัณโรคในรูปแบบหลังกฎหมาย

ความสำคัญของ PLR ในฐานะวิธีการที่ละเอียดอ่อนนั้นดีเป็นพิเศษสำหรับรูปแบบหลังกฎหมาย ในขณะที่ในรูปแบบเหล่านี้ วิธีการทางคลินิก-รังสีวิทยา และวิธีการทางแบคทีเรียวิทยาแบบดั้งเดิมสำหรับการจำแนกเชื้อมัยโคแบคทีเรียม วัณโรคในวัสดุที่ใช้วินิจฉัยนั้นมีประสิทธิภาพเพียงเล็กน้อย

เมื่อดำเนินการตรวจสอบเพิ่มเติม ผลการวิเคราะห์ PLR เป็นบวกในผู้ป่วยวัณโรคระบบฆราวาส 16 รายจาก 17 รายและเป็นลบในผู้ป่วยวัณโรคที่ไม่ได้ใช้งาน 4 รายและผู้ป่วยที่ไม่ใช่วัณโรค 39 ราย ระบบ chovo

ประสิทธิผลของการวิเคราะห์ PLR ได้รับการแสดงให้เห็นในการติดตามผลของการดูดเข้าไปในสมองแบบเรื้อรังในผู้ป่วยที่มีไข้โดยไม่ทราบสาเหตุ ในกรณีที่สงสัยว่าจะเป็นวัณโรค เพื่อวินิจฉัยวัณโรคต่อมน้ำเหลืองอักเสบในเด็ก ได้มีการนำตัวอย่างการเจาะทะลุและชิ้นเนื้อ 102 ชิ้นจากเด็ก 67 คนที่สงสัยว่าเป็นวัณโรคต่อมน้ำเหลืองอักเสบ ได้รับผลลัพธ์ที่เป็นบวก: การใช้วิธี PLR แบบเรียลไทม์ - 71.6% กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ - 46.3% การสำรวจวัฒนธรรม - 41.8% ในการศึกษาเพิ่มเติมเกี่ยวกับการตัดชิ้นเนื้อต่อมน้ำเหลืองจำนวน 50 ชิ้นในผู้ป่วยที่เป็นโรคผื่นลูกแมว ผลลัพธ์ทั้งหมดเป็นลบ ดังนั้นจึงแสดงให้เห็นความจำเพาะ 100% ของการวิเคราะห์ PLR ในการศึกษานี้ การเจาะชิ้นเนื้อต่อมน้ำเหลืองแสดงให้เห็นความเป็นไปได้ในการตรวจพบเชื้อ M. avium

การวินิจฉัยวัณโรคในสตรีในกรณีมีบุตรยากถือเป็นปัญหาการวินิจฉัยที่สำคัญที่สุดประการหนึ่ง เมื่อติดตามผลการตรวจชิ้นเนื้อเยื่อบุโพรงมดลูก PLR เครื่องดูดเยื่อบุโพรงมดลูก และตัวอย่างเนื้อเยื่อจากกระเป๋าดักลาส พบว่าผู้ป่วย 14 ราย (56%) ที่ได้รับการผ่าตัดผ่านกล้องโดยสงสัยว่าเป็นวัณโรคเป็นผลบวก ด้วยความช่วยเหลือของกล้องจุลทรรศน์สเมียร์และการเพาะเลี้ยง ทำให้ได้ผลลัพธ์ที่เป็นบวกอย่างแน่ชัด 1 และ 2 รายการ ตอนเหล่านี้เป็นผลบวกของ PLR เช่นกัน ผลลัพธ์ที่เป็นบวกของ PLR ส่วนใหญ่ได้รับการรายงานก่อนตอนของ เครื่องหมายลักษณะวัณโรคขึ้นอยู่กับข้อมูลการตรวจชิ้นเนื้อ จำนวนที่ต่ำกว่า - หากสงสัยว่าเป็นวัณโรคจากข้อมูลการส่องกล้อง ผลลัพธ์เชิงบวกเพียงรายการเดียวของการวิเคราะห์ PLR ที่ถูกปฏิเสธเมื่อไม่มีหลักฐานการส่องกล้องสำหรับวัณโรค

เมื่อวินิจฉัยวัณโรคในรูปแบบขั้นสูงแพทย์มักกังวลเกี่ยวกับความเป็นไปได้ในการตรวจพบโรคเมื่อตรวจตัวอย่างเลือดโดยใช้วิธี PLR ข้อมูลวรรณกรรมระบุว่าการตรวจหา DNA ของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis จากตัวอย่างเลือดเป็นไปได้ในรูปแบบขั้นสูงของการติดเชื้อ HIV ตรวจพบเชื้อ Mycobacterium tuberculosis DNA โดยเฉพาะในวัณโรคทั่วไปของอวัยวะต่างๆ ในผู้ป่วยมะเร็งที่ได้รับการปลูกถ่ายและกดภูมิคุ้มกัน

การจำแนกชนิดของเชื้อมัยโคแบคทีเรีย

วิธี PLR สามารถระบุได้อย่างมีประสิทธิภาพในการระบุเชื้อ Mycobacterium tuberculosis complex และ Mycobacteria ที่ไม่ใช่วัณโรคประเภทต่างๆ อย่างชัดเจนหลังจากหยุดการเจริญเติบโตขั้นต้น ในโรคประเภทนี้ PLR สามารถประหยัดเวลาได้ 7-10 วันที่จำเป็นสำหรับการระบุวัฒนธรรมเพิ่มเติมของผลลัพธ์ที่เป็นบวก การติดตามผลโดยใช้วิธี PLR นั้นง่ายกว่าในทางเทคนิค เนื่องจากไม่จำเป็นต้องเตรียมตัวอย่างที่ซับซ้อนของวัสดุทางคลินิกเพื่อให้ได้ความไวสูง เมื่อตรวจสอบวัฒนธรรมที่เป็นบวก 80 รายการในระบบการทดสอบดังกล่าว (MB VAST. Company Organon) ผลลัพธ์เชิงบวกทั้งหมดของการวิเคราะห์ PLR นั้นมีความจำเพาะเจาะจงอย่างเคร่งครัดและดำเนินการในช่วงระยะเวลา 1 วัน เพื่อระบุเชื้อมัยโคแบคทีเรียประเภทอื่นๆ เมื่อแยกได้ในวัฒนธรรม DNA ของสิ่งมีชีวิตจะถูกผสมเข้ากับหัวตรวจ DNA เฉพาะที่มีป้ายกำกับว่าอะคริดีน และสปีชีส์นี้ตรวจพบโดยการปรากฏของเคมีเรืองแสงด้านหลังเคมิลัม อินโนมิเตอร์เพิ่มเติม หรือบนของผสมไนโตรเจนด้วยการประเมินด้วยการมองเห็นหลังจากการผสมพันธุ์ . นอกจากชุดนี้แล้ว ยังมีการระบุสายพันธุ์อีกจำนวนหนึ่ง: กลุ่มเชื้อ Mycobacterium tuberculosis M. avium, M. avium complex, M. kansasii และ M. gordonae

A.Telenti และ spivat ได้พัฒนาวิธีการที่ง่ายและราคาไม่แพงอย่างชัดเจนในการจำแนกสายพันธุ์ของสายพันธุ์ที่มีความสำคัญทางคลินิกของมัยโคแบคทีเรีย โดยอาศัย PLR และการประมวลผลเอนไซม์ที่มีข้อจำกัดสองตัวในเวลาต่อมา (เอนไซม์ที่อนุญาตให้เจ้าหน้าที่ตัดโมเลกุล DNA ที่จุดเฉพาะ) เมื่อทำเช่นนี้ ชิ้นส่วน DNA จะถูกขยาย เข้ารหัสโปรตีนช็อกความร้อน (65 kDa) หลังจากนั้นชิ้นส่วน DNA ที่มีขนาดนิวคลีโอไทด์ 439 คู่จะถูกแยกออกเป็น PLR โดยเอนไซม์สองตัว - Bste II และ Hae III จากนั้น เราวิเคราะห์ vikorista และ agarose gel electrophoresis โดยแยกผลิตภัณฑ์สองชนิด ซึ่งหมายถึงขนาด (จำนวนคู่นิวคลีโอไทด์) สำหรับชุดชิ้นส่วน DNA มาตรฐานที่เสริมกัน (เครื่องหมาย DNA ระดับโมเลกุล) มากถึง 100 ถึง 1,000 คู่นิวคลีโอไทด์ ในสายพันธุ์ผิวหนัง (M. tuberculosis, M. avium, M. intracelulare, M. kansasii, M.fortuitum) ตรวจพบชิ้นส่วน DNA 2 หรือ 3 ชิ้นที่มีขนาดต่างกันสำหรับเอนไซม์จำกัดผิวหนัง การรวมกันของชิ้นส่วน DNA ที่มีขนาดต่างกันทำให้เกิดความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์

เทคโนโลยีไมโครชิป DNA ทางชีวภาพกำลังพัฒนา ซึ่งจะช่วยระบุเชื้อมัยโคแบคทีเรียได้มากกว่า 100 ชนิดในการศึกษาครั้งเดียว

การระบุชนิดยังสามารถดำเนินการได้โดยใช้การขยาย PLR เพิ่มเติมของขอบเขตตัวแปรของ 16S rRNA พร้อมการจัดลำดับเพิ่มเติมของแอมพลิคอนเมื่อจัดให้สอดคล้องกับโครงสร้างปฐมภูมิเฉพาะชนิด ซึ่งช่วยให้สามารถระบุตัวตน Icover เชื้อมัยโคแบคทีเรียได้มากกว่า 40 ชนิด

PLR เพิ่มเติมสามารถตามด้วยการระบุชนิดของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis complex ซึ่งรวมถึงการแยกความแตกต่างของ M. bovis และ M. bovis BCG เพื่อจุดประสงค์นี้ จึงมีการวิเคราะห์การมีอยู่หรือการมีอยู่ของยีนบางตัวในบริเวณจีโนมของ RD1 กข9 และ กข10 RD1 มีอยู่ใน M. bovis BCG แต่ก็มีอยู่ในสายพันธุ์ที่มีความรุนแรงเช่นกัน รวมทั้ง M. bovis

ความสำคัญของความไวของยาต่อเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคด้วยความช่วยเหลือของ PLR

การวิจัยวิธีการทางอณูพันธุศาสตร์เพื่อประเมินความไวของยาหรือการดื้อยาของเชื้อมัยโคแบคทีเรียต่อวัณโรคนั้นอาศัยการตรวจหาการกลายพันธุ์ในลำดับนิวคลีโอไทด์ระยะแรกของยีนที่รู้จัก วิธีการหลักจะขึ้นอยู่กับการอ่านโดยตรง (การจัดลำดับ) ของลำดับเหล่านี้หลังการขยายขนาด หรือการใช้การผสมข้ามส่วนของชิ้นส่วน DNA ที่ติดฉลากไบโอติน การขยายระหว่าง PCR ด้วยโพรบ DNA ทั้งสองสายพันธุ์ส่งการแทนที่ที่ตรวจพบในลำดับนิวคลีโอไทด์ ซึ่งเมื่อโพรบ DNA ของ vicoristan ทำให้เกิดการผสมพันธุ์หรือมีข้อบกพร่องบนเยื่อหุ้มไนโตรเซลลูโลสด้วยความช่วยเหลือของคอนจูเกตของเอนไซม์ (streptavidin-luna phosphatase) - วิธี LIPA-Rif-TB

วิธีการหรี่แสงฟลูออเรสเซนซ์ในโพรบ DNA คงที่เฉพาะที่บนไมโครเพลท ซึ่งเสริมกับการกลายพันธุ์ที่ทราบในการขยายยีนที่เกี่ยวข้องกับความไวของยาหรือการดื้อยาโดยใช้ PLR โดยเลิกใช้ชื่อของวิธีไมโครไบโอชิป อัลกอริธึมหลักสำหรับการเฝ้าระวังการโจมตี หลังจากได้เห็น DNA จากตัวอย่างทางคลินิกหรือการเพาะเลี้ยงเชื้อมัยโคแบคทีเรียแล้ว จำเป็นต้องทำ PLR เพื่อขยายชิ้นส่วนที่คล้ายกันของยีน G ซึ่งมีหน้าที่รับผิดชอบต่อความไวของยาต่อยา rifampicin หรือยีน katG และยีน inha ที่เข้ารหัสโปรตีนมัยโคแบคทีเรียที่ไวต่อ ไอโซไนอาซิด ผลลัพธ์ของ PLR ได้รับการประเมินโดยใช้ agarose gel electrophoresis ซึ่งยืนยันการนำชิ้นส่วน DNA ที่คล้ายกันออกจาก DNA ดั้งเดิม จากนั้นดำเนินการ PLR รอบที่ 2 เพื่อติดฉลากเรืองแสงเข้าไปใน DNA ผลลัพธ์ของ PLR ได้รับการยืนยันอีกครั้งโดยเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส หลังจากนั้นจะทำการผสมพันธุ์ (ฟักตัวในชั่วข้ามคืน) ด้วยการกวนวัสดุที่สกัดแล้วบนไบโอชิปซึ่งเป็นโพรบ DNA สั้นจำนวนมากที่บันทึกไว้ในขวดเล็กซึ่งเป็นคอมพิวเตอร์ระดับประถมศึกษาถึงลำดับนิวคลีโอไทด์ของวัณโรคมัยโคแบคทีเรียมชนิดละเอียดอ่อน ณ จุดที่อาจมีการกลายพันธุ์ เช่นเดียวกับลำดับการกลายพันธุ์ที่ถือว่าต้านทานต่อยาได้ การพัฒนาหัวตรวจ DNA บนจานมีความสำคัญมาก และรูบาร์บต้องระมัดระวังเรื่องการเรืองแสงระหว่างการผสมพันธุ์ เพื่อตรวจสอบผลลัพธ์โดยใช้อุปกรณ์พิเศษที่อ่านผลการวิจัย ด้วยเหตุนี้จึงได้รับผลการวิเคราะห์โดยใช้โปรแกรมคอมพิวเตอร์พิเศษเพิ่มเติม

วิธีอื่นในการประเมินความไวของยาสำหรับเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคโดยใช้เทคโนโลยี PLR แบบเรียลไทม์ยังคงได้รับการพัฒนาอยู่ ซึ่งทำให้สามารถดำเนินการติดตามผลในโหมดขวดปิดได้

ในรูป การนำเสนอ 13-13 รายการผลการวิเคราะห์การเพาะเลี้ยงทางคลินิกของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคโดยพิจารณาการดื้อยาต่อยา rifampicin โดยใช้ PLR แบบเรียลไทม์: 218 - ตัวอย่างควบคุม (ไวต่อยา rifampicin); 93 - การควบคุมเชิงบวกสำหรับการกลายพันธุ์ Ser-Trp TCG-TGG 4482 - การควบคุมเชิงบวกสำหรับการกลายพันธุ์ของ Ser-Leu TCG-TTG 162-322 - ภาพทดลอง ผลการวิเคราะห์เส้นโค้งการขยายจลนศาสตร์ใน 4 ช่องสัญญาณ: ช่อง 1: 393 - การควบคุมเชิงบวกสำหรับการกลายพันธุ์ Ser-Trp TCG-TGG; ช่อง 2: 4482 - การควบคุมเชิงบวกสำหรับการกลายพันธุ์ของ Ser-Leu TCG-TTG 162, 163, 172, 295 - ภาพทดลอง; ช่องที่ 4: เส้นโค้งการขยายจลน์ของสัญญาณทั้งหมดที่มีส่วนร่วมในการทดลอง การควบคุมปฏิกิริยาการขยายสัญญาณเชิงบวก สรุป: ผลการวิเคราะห์เผยให้เห็นการกลายพันธุ์ต่อไปนี้ที่บ่งบอกถึงการดื้อยา rifampicin: ในตัวอย่างนี้ 162,163,172,295 - Ser-Leu TCG-TTG นี่เป็นหลักการเดียวกันในการคัดเลือกเพื่อพิจารณาการดื้อยาต่อไอโซไนอะซิดตามยีน katG และ inhA ซึ่งเป็นส่วนที่ใหญ่ที่สุดในช่วงแรกของการกลายพันธุ์

การจำแนกสายพันธุ์ของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis

วิธีการที่ทันสมัยที่สุดในการระบุสายพันธุ์ของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคคือเทคโนโลยีที่เรียกว่า dovginข้อจำกัดแฟรกเมนต์โพลิมอร์ฟิซึม (RFLP หรือ RFLP ในเวอร์ชันภาษาอังกฤษ) และขึ้นอยู่กับ DNA ที่แยกส่วน (การจำกัด) ของไมโคแบคทีเรียมวัณโรคกับเอนไซม์ Pvu II และการผสมเพิ่มเติมของ ชิ้นส่วนที่มีลำดับเฉพาะบน DNA ขององค์ประกอบซ้ำ IS6110 ความแปรปรวนในสปีชีส์เกิดขึ้นได้จากการก่อตัวของ IS6110 จำนวนซ้ำที่แตกต่างกันและการเผยแพร่บน DNA เช่นเดียวกับความหลากหลายของไซต์ระหว่างจุดโจมตีหลักสำหรับเอนไซม์จำกัด (ไซต์จำกัด) และองค์ประกอบ IS6110 เทคโนโลยีนี้มีความซับซ้อนและใช้แรงงานมาก หลังจากประมวลผล DNA ที่เห็นจากการเพาะเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคด้วยเอนไซม์จำกัดแล้ว ให้ทำเจลอิเล็กโทรโฟเรซิส จากนั้นถ่ายโอนชิ้นส่วน DNA จากแหล่งต่างๆ ไปยังเยื่อหุ้มไนโตรเซลลูโลส ทำการผสมพันธุ์กับชิ้นส่วนขององค์ประกอบ IS6110 และแสดงผลลัพธ์ของปฏิกิริยาของเอนไซม์เพิ่มเติม การครอบครองเด็ก Smug ที่เฉพาะเจาะจงนั้นมีลักษณะเฉพาะคือ DNA ของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรคสายพันธุ์เฉพาะ นอกจากการวิเคราะห์ด้วยคอมพิวเตอร์แล้ว ยังกำหนดเอกลักษณ์หรือความหลากหลายของสายพันธุ์ด้วย แม้ว่าวิธี RFLP จะมีการเลือกปฏิบัติมากที่สุด แต่ก็เผยให้เห็นความแตกต่างจำนวนมากที่สุดในสายพันธุ์ที่วิเคราะห์ แต่ไม่ได้ผลเมื่อมีการทำซ้ำ IS6110 จำนวนน้อย (น้อยกว่า 5) เช่น ระวังพฤติกรรมใดๆ ในรูป 13-14 นำเสนอผลลัพธ์ของการพิมพ์สายพันธุ์ RFLP

อีกทางเลือกหนึ่งอาจเป็นวิธีการสร้างสโปลิโกไทป์ - การวิเคราะห์ความหลากหลายในลำดับดีเอ็นเอสเปเซอร์ - อยู่ตรงกลางระหว่างการทำซ้ำโดยตรงของบริเวณ DR เมื่อดำเนินการสร้างสายพันธุ์ของสายพันธุ์ ให้ดำเนินการ PLR ด้วยไพรเมอร์ที่ตัดกันส่วน DR หลังจากนั้นจะมีการสร้างชิ้นส่วนของ DNA ที่แตกต่างกันซึ่งจะผสมกับส่วนตรงกลางที่แปรผันได้ของ DNA นำเสนอการวิเคราะห์ลำดับตัวเว้นวรรคของบริเวณ DR อิงตามข้อมูลก่อนการศึกษา ซึ่งง่ายกว่า มีประสิทธิผลมากกว่า และมีประโยชน์สำหรับการคัดกรองสายพันธุ์เบื้องต้นและการวิเคราะห์ทางระบาดวิทยาขั้นสูง รวมถึงการตรวจสอบวัสดุทางคลินิกเพิ่มเติม

แน่นอนว่าวิธีที่มีประสิทธิภาพและเข้าถึงได้ทางเทคโนโลยีมากกว่าคือ VNTR (คำย่อของคำภาษาอังกฤษ) หรือวิธีการระบุจำนวนตัวแปรของการซ้ำซ้อนที่แน่นอนใน DNA ของเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค วิธีการนี้ใช้ PLR แบบผู้ชนะเท่านั้น และไม่ต้องการการปรับแต่งเพิ่มเติม ขึ้นอยู่กับจำนวนครั้งของการทำซ้ำตามกันในสายพันธุ์ที่แตกต่างกันและในตำแหน่งที่แตกต่างกัน ชิ้นส่วนที่มีขนาดต่างกันจะถูกระบุและวิเคราะห์ในผลลัพธ์อิเล็กโตรฟีโรแกรมของผลิตภัณฑ์ PLR ตามที่นักวิจัยระบุว่า วิธี VNTR ช่วยให้แยกแยะความเครียดได้ในระดับที่สูงกว่าวิธี RFLP

ยังคงให้ความสนใจอย่างมากกับสายพันธุ์ Mycobacterium Tuberculosis ที่ขยายตัวของตระกูล W-Beijing (บางครั้งเรียกว่าสายพันธุ์ปักกิ่ง) ซึ่งมีการดื้อยาในระดับสูง

ประโยชน์หลักของการวิจัยอณูชีววิทยา

เอกสารกำกับดูแลพื้นฐานเมื่อดำเนินการ PLR

คำสั่งของกระทรวงสาธารณสุขของรัสเซีย: หมายเลข 45 ลงวันที่ 7.02.2000 r.. หมายเลข 109 ลงวันที่ 21.03.2003 r.. หมายเลข 64 ลงวันที่ 21.02.2000 r. คำแนะนำที่เป็นระบบ: 1.3.1888-04 “หุ่นยนต์องค์กรใน การตรวจสอบวัสดุโดยใช้วิธี PLR ที่ติดเชื้อทางชีวภาพที่ทำให้เกิดโรคของกลุ่มที่ทำให้เกิดโรค III-IV"; 1.3.1794-03 “การจัดระเบียบงานในระหว่างการสอบสวนโดยใช้วิธี PLR ของวัสดุที่ติดเชื้อจุลินทรีย์ของกลุ่มก่อโรค I-II” เกิดปี 2546; 3.5.5.1034-01 “การไม่ปนเปื้อนของวัสดุที่ผ่านการทดสอบล่วงหน้าซึ่งติดเชื้อแบคทีเรียของกลุ่มก่อโรค I-IV ในระหว่างวิทยาการหุ่นยนต์โดยใช้วิธี PLR”, ภาคผนวก 11 ปี 2544 ของคำแนะนำสำหรับวิธีการเติมจุลินทรีย์แบบครบวงจร วันที่วัณโรคเกิดขึ้น ตรวจพบ วินิจฉัย และรักษา

พนักงาน

การวิจัยทางอณูชีววิทยาสามารถดำเนินการโดยแพทย์ของการวินิจฉัยในห้องปฏิบัติการทางคลินิก แพทย์ - แบคทีเรียวิทยา แพทย์ - นักไวรัสวิทยา นักชีววิทยาของห้องปฏิบัติการวินิจฉัยทางคลินิก รวมถึงแพทย์ที่มีความรู้ทางการแพทย์โดยเฉลี่ย ซึ่งผ่านความเชี่ยวชาญและคุณวุฒิขั้นสูงตามลำดับที่จัดตั้งขึ้น

ทำความสะอาดบริเวณห้องปฏิบัติการ

จำเป็นต้องมีสิ่งอำนวยความสะดวกในห้องปฏิบัติการต่อไปนี้:

• พื้นที่การประมวลผลตัวอย่างเป็นห้องปฏิบัติการที่ออกแบบมาเพื่อทำงานกับสารติดเชื้อของกลุ่มก่อโรค III-IV ตามคำแนะนำเชิงระเบียบวิธี 13.1888-04
• พื้นที่สำหรับการเตรียมสารผสมปฏิกิริยา PLR คือพื้นที่ห้องปฏิบัติการซึ่งมีการถ่ายโอนสารละลายจากการปนเปื้อนภายในห้องปฏิบัติการไป นั่นคือโซน "สะอาด"
• สำหรับการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ PLR จะใช้วิธีการอิเล็กโตรโฟรีซิสหรือไฮบริไดเซชัน สภาพแวดล้อมในห้องปฏิบัติการ ซึ่งชิ้นส่วน DNA ที่ทวีคูณจะถูกดึงออกมาจากหลอดขยายสัญญาณ และดูเหมือนว่าจะสูญหายไปในนั้น คิ้วกลางมากเกินไปเห็นได้ชัดว่าขึ้นอยู่กับห้องปฏิบัติการ PLR (ส่วนแทรกแบบวิธี 1.3.1794-03, ส่วนแทรกแบบวิธี 1.3.1888-04) อาจถูกแยกออกจากตำแหน่งที่กำหนดไว้ในจุดไปข้างหน้าโดยสิ้นเชิง จำเป็นต้องแยกการเคลื่อนย้ายจากพื้นที่สำหรับอิเล็กโตรโฟรีซิสไปยังพื้นที่สำหรับการประมวลผลตัวอย่างและพื้นที่ "สะอาด" ของบุคลากร อุปกรณ์ วัสดุ หรือวัตถุใด ๆ รวมถึงการถ่ายโอนผ่านระบบระบายอากาศหรือเป็นผลมาจากท่อ . โซนนี้ไม่จำเป็นสำหรับการตรวจจับฟลูออริเมตริกของผลิตภัณฑ์ PLR
• สถานที่สำหรับเก็บรักษาเอกสารและผลการประมวลผลมีคอมพิวเตอร์และอุปกรณ์สำนักงานที่จำเป็น อุปกรณ์นี้สามารถติดตั้งอุปกรณ์ที่จะรับประกันการตรวจจับผลิตภัณฑ์ PLR โดยไม่ต้องถอดท่อ - เครื่องตรวจจับ PLR แบบเรืองแสงและวงจรความร้อนสำหรับ PLR แบบเรียลไทม์

มาตรการด้านสุขอนามัยและระบาดวิทยาก่อนการเก็บเสมหะครั้งแรกนั้นคล้ายคลึงกับมาตรการทางจุลชีววิทยามาตรฐานสำหรับการทำงานกับวัณโรคจากเชื้อมัยโคแบคทีเรีย

อุปกรณ์ห้องปฏิบัติการสำหรับการวินิจฉัย PLR

ห้องปฏิบัติการมีอุปกรณ์สำหรับห้องถัดไป

• ห้องเตรียมตัวอย่าง ตำแหน่ง: ลามิเนตคลาส II อัตราเร็ว 1.2: เทอร์โมสแตทโซลิดสเตตพร้อมฝาปิดที่ให้ความร้อนสำหรับหลอดประเภท Eppendorf; เครื่องหมุนเหวี่ยงขนาดเล็กสำหรับการปฏิวัติ TOV 13 รอบต่อหน่วย เครื่องหมุนเหวี่ยง (“ กระแสน้ำวน”); ตู้เย็นที่มีอุณหภูมิตั้งแต่ -20 ° C ถึง +10 ° C; ปิเปตที่มีปริมาตรแปรผันของซีรีส์ "Proline" ปั๊มพร้อมขวดวาง OM-1; ขาตั้งกล้องสำหรับปิเปต ขาตั้งหุ่นยนต์วาง 200x0.5 มล. หุ่นยนต์ขาตั้ง 50x1.5 มล. ชั้นวางสำหรับจัดเก็บหลอดขนาด 80x1.5 มล.
• ห้องเตรียมส่วนผสมปฏิกิริยา: ห้องอบแห้ง PLR-box (Laminar-C. 110 ซม.); เครื่องหมุนเหวี่ยง - "กระแสน้ำวน"; ปิเปตที่มีปริมาตรแปรผันของซีรีส์ "Proline" ขาตั้งกล้องสำหรับปิเปต ขาตั้งหุ่นยนต์วาง 200x0.2 มล. ชั้นวางสำหรับจัดเก็บหลอดขนาด 80x1.5 มล. ตู้เย็นที่มีช่วงอุณหภูมิตั้งแต่ -20 ° C ถึง + 10 ° C;
• ห้องสำหรับอิเล็กโทรโฟรีซิส: ห้องสำหรับอิเล็กโตรโฟรีซิสแนวนอน เจเรโล ซิซลิฟเนีย; ทรานส์ลูมิเนเตอร์;
• เครื่องขยายสัญญาณ DNA หรือเครื่องวิเคราะห์กรดนิวคลีอิก (PLR แบบเรียลไทม์) พร้อมคอมพิวเตอร์และซอฟต์แวร์ บางทีสถานที่นั้นอาจเป็นห้องส่วนตัว เทคโนโลยี PLR กำลังได้รับการทดสอบแบบเรียลไทม์ ไม่จำเป็นต้องมีห้องสำหรับอิเล็กโตรโฟรีซิส

การควบคุมความสว่างภายนอก

เพื่อให้มั่นใจว่าได้รับผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ตามวัตถุประสงค์ ห้องปฏิบัติการมีหน้าที่รับผิดชอบในการเข้าร่วมในระบบการประเมินคุณภาพการวิจัยในห้องปฏิบัติการจากภายนอก

ผู้เข้าร่วมในระบบควบคุม yakosti จะยกเลิก 12 หลอดที่มีสารแขวนลอยของเซลล์แบคทีเรียแบบแห้งซึ่งสองหลอดประกอบด้วยโคลิฟอร์ม E. Coir, 3 หลอดที่มีเชื้อมัยโคแบคทีเรียมวัณโรค (สายพันธุ์ auvirulent) ที่ความเข้มข้น 10 2 / มล.; 3 หลอดที่มีคลิตินคล้ายกับความเครียดที่ความเข้มข้น 10 4 / มล. มัยโคแบคทีเรียที่ไม่ใช่วัณโรค 2 หลอด M. avium-intracelulare และ M. kansasii ที่ความเข้มข้น 10 5 / มล.

การทดสอบเพื่อประเมินกระดูกครั้งใหม่ควรได้รับการทดสอบในห้องปฏิบัติการอิสระสองแห่งก่อน ซึ่งเป็นหลักฐานที่ดีของการทำงานในด้านนี้